侧孢短芽孢杆菌抗菌肽与食品添加剂的联合抑菌效应研究

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随着食品工业的发展以及人们对食品安全性要求的提高,高效、安全的天然食品添加剂越来越受到人们的重视。抗菌肽Brevilaterin为实验室前期发现的由侧孢短芽孢杆菌产生的抗菌肽,具有酸碱稳定性高、抑菌谱广和热稳定性好等优点。为了进一步拓宽抗菌肽Brevilaterin的抑菌谱,降低其在食品防腐中的使用量,本研究考察了抗菌肽brevilaterin与食品添加剂的联合抑菌效果。筛选了与抗菌肽Brevilaterin联合使用具有协同作用的添加剂,形成了具有广谱抑菌活性的添加剂复配产品,以期为抗菌肽Brevilaterin在食品防腐中的应用提供理论指导。本试验采用微量二倍稀释法测得Brevilaterin和12种食品添加剂对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、蜡样芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度,结果表明:nisin、聚赖氨酸、肉桂醛和鱼精蛋白的抑菌效果较好,最小抑菌浓度小于0.5 mg/m L。通过微量棋盘稀释法研究了Brevilaterin与食品添加剂的联合抑菌效果,结果表明:以金黄色葡萄球菌为指示菌,Brevilaterin-聚赖氨酸的部分抑菌浓度指数为0.5,表现为协同抑菌关系,Brevilaterin-nisin的部分抑菌浓度指数为0.75,Brevilaterin-鱼精蛋白的部分抑菌浓度指数为0.625,均表现为部分协同抑菌关系;以单增李斯特菌为指示菌,Brevilaterin-聚赖氨酸、Brevilaterin-丁香酚、Brevilaterin-鱼精蛋白和Brevilaterin-苯甲酸钠的部分抑菌浓度指数为0.625,Brevilaterin-磷酸三钠和Brevilaterin-(EDTA-Na2)的部分抑菌浓度指数为0.75,均表现为部分协同关系;以蜡样芽孢杆菌为指示菌,Brevilaterin-茶多酚的部分抑菌浓度指数为0.5,表现为协同抑菌关系,Brevilaterin-肉桂醛、Brevilaterin-聚赖氨酸和Brevilaterin-苯甲酸钠的部分抑菌浓度指数为1,均表现为相加关系;以枯草芽孢杆菌为指示菌,Brevilaterin-茶多酚、Brevilaterin-肉桂醛、Brevilaterin-磷酸三钠和Brevilaterin-山梨酸钾的部分抑菌浓度指数为1,表现为相加关系。由以上结果可知,Brevilaterin分别与聚赖氨酸和肉桂醛联用时对革兰氏阳性菌具有联合抑菌作用。采用与革兰氏阳性菌相同方法测得Brevilaterin和11种食品添加剂对革兰氏阴性菌大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、阪崎肠杆菌和铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度和联合抑菌关系。结果表明:聚赖氨酸、肉桂醛、丁香酚和茶多酚对革兰氏阴性菌的抑菌效果较好,最小抑菌浓度均小于1 mg/m L。联合抑菌结果表明:以大肠杆菌为指示菌,Brevilaterin-柠檬酸的部分抑菌浓度指数为0.5,Brevilaterin-(EDTA-Na2)的部分抑菌浓度指数为0.141,表现为协同抑菌关系;以阪崎肠杆菌为指示菌,Brevilaterin-磷酸三钠和Brevilaterin-(EDTA-Na2)的部分抑菌浓度指数为0.5,表现为协同抑菌关系,Brevilaterin-曲酸的部分抑菌浓度指数为0.75,表现为部分协同抑菌关系;以鼠伤寒沙门氏菌为指示菌,Brevilaterin-(EDTA-Na2)的部分抑菌浓度指数为0.1875,Brevilaterin-磷酸三钠的部分抑菌浓度指数为0.5,表现为协同抑菌关系,Brevilaterin-柠檬酸、Brevilaterin-曲酸和Brevilaterin-苯甲酸钠的部分抑菌浓度指数为0.75,表现为部分协同抑菌关系;以铜绿假单胞菌为指示菌,Brevilaterin-(EDTA-Na2)的部分抑菌浓度指数为0.1875,表现为协同抑菌关系,Brevilaterin-柠檬酸、Brevilaterin-曲酸和Brevilaterin-磷酸三钠的部分抑菌浓度指数为0.75,表现为部分协同抑菌关系。由以上结果可知,Brevilaterin分别与磷酸三钠、柠檬酸和EDTA-Na2联用对革兰氏阴性菌具有协同抑菌作用。根据上述协同抑菌结果,采用菌落计数法研究Brevilaterin、nisin和柠檬酸联用效果,结果表明当Brevilaterin-nisin-柠檬酸浓度分别为20 AU/m L、0.3125 mg/m L和0.625 mg/m L时对革兰氏阳性菌和阴性菌都有较好的抑菌效果。Brevilaterin-nisin-柠檬酸浓度为200 AU/m L、1.25 mg/m L和3.125 mg/m L时对牛奶中金黄色葡萄球菌有良好的抑菌效果,8 d内菌落数在4Lg CFU/m L,比单独使用Brevilaterin(200 AU/m L)、nisin(1.25 mg/m L)和柠檬酸(3.125 mg/m L)菌落数降低了3.81Lg CFU/m L。Brevilaterin-nisin-柠檬酸浓度为800 AU/m L、3.125 mg/m L和6.25 mg/m L时对牛奶中大肠杆菌的抑菌效果较好,8 d内菌落数在5Lg CFU/m L,比单独使用Brevilaterin(800 AU/m L)、nisin(3.125 mg/m L)和柠檬酸(6.25 mg/m L)菌落数降低2.82Lg CFU/m L。
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