【摘 要】
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目的 细菌耐药是抗感染领域较为棘手的问题,而碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)的出现和流行更是对全球公共卫生领域产生了严重威胁。临床工作中,我们发现产OXA-48-like碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌通常介导较低的耐药水平,但用碳青霉烯类抗生素单药治疗却达不到治疗效果,这很可能与异质性耐药有关。本研究旨在探索产OX
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目的 细菌耐药是抗感染领域较为棘手的问题,而碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)的出现和流行更是对全球公共卫生领域产生了严重威胁。临床工作中,我们发现产OXA-48-like碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌通常介导较低的耐药水平,但用碳青霉烯类抗生素单药治疗却达不到治疗效果,这很可能与异质性耐药有关。本研究旨在探索产OXA-48肺炎克雷伯菌碳青霉烯异质性耐药的机制,为临床联合用药提供理论依据。方法 通过PCR从273株临床分离的肺炎克雷伯菌中筛选blaOXA-48-like基因,对blaOXA-48-like阳性菌株进行全基因组学分析,明确其ST型、耐药基因及质粒基因结构。通过群体谱分析(Population analysis profile,PAP)明确研究菌株的碳青霉烯异质性耐药表型。挑选耐药亚群,并通过传代实验,明确耐药亚群的异质性和稳定性。通过qRT-PCR明确原始临床菌株及其耐药亚群的blaOXA-48-like的mRNA相对表达量,明确肺炎克雷伯菌异质性耐药与OXA-48的关系。并通过全基因组学测序及比较基因组学分析,探讨产OXA-48肺炎克雷伯菌碳青霉烯异质性耐药的潜在机制。结果 从273株临床肺炎克雷伯菌株中筛选获得4株携带blaOXA-48-like基因的肺炎克雷伯菌,全基因组学提示其均为ST15型,携带的blaOXA-48-like基因型都为blaOXA-232。经PAP实验证实4株菌株均为亚胺培南和美罗培南的异质性耐药菌株。耐药亚群大部分菌株为均一性耐药,少部分仍具有异质性耐药表型,且耐药亚群的药敏表型和均一性表型传代后都具有稳定性。通过比较原始临床菌株及其耐药亚群blaOXA-48-like的mRNA相对表达量,发现耐药亚群blaOXA-48-like的mRNA相对表达量均高于原始临床菌株。比较基因组学分析,多株耐药亚群菌株中发现有外膜孔蛋白ompC和D-蛋氨酸转运系统metl等突变。结论 4株携带blaOXA-48-like基因的肺炎克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南异质性耐药,耐药亚群大部分为均一性耐药,其药敏表型及均一性表型具有稳定性。肺炎克雷伯菌碳青霉烯异质性耐药与blaOXA-48-like表达量升高有关,外膜孔蛋白ompC和D-蛋氨酸转运系统metl的突变可能为产OXA-48肺炎克雷伯菌碳青霉烯异质性耐药另一潜在机制。
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