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背景与目的宫颈癌的发病率占妇科恶性肿瘤的第一位。宫颈癌的病因尚未完全阐明，已经明确的是与致癌性的人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）感染密切相关。但并不是所有感染HPV者都会发生癌变。宫颈癌的发生和发展是一个极其复杂的过程，涉及多种与细胞的生物学过程有关的基因结构与表达的异常。人们在研究宫颈癌的发生发展机制时，发现微小RNA（microRNA）分子表达失调与肿瘤的发生密切相关。microRNA（简称miRNA或miR）是一类长度约20～25个核苷酸，进化保守的，具有调控功能的单链非编码RNA分子。成熟的miRNA参与细胞的增殖、分化、发育和凋亡过程。这些小分子RNA的作用类似于癌基因或抑癌基因。例如，miR-15a/16-1在慢性淋巴细胞白血病中群集缺失或下调；miRNA let-7在肺癌和乳腺癌中下调；miR-17在肺癌中表达水平上调。Wang等发现，miR-126、miR-143、miR-154在宫颈癌中表达水平下降，而miR-15b、miR-16、miR-146a、miR-155在宫颈癌中的表达水平升高。miRNA-143在结直肠癌中表达异常，上调结肠癌细胞miR-143的表达水平，能够抑制肿瘤细胞增殖，促进凋亡。miR-143在宫颈癌中的研究不多，我们之前的研究显示miR-143在宫颈癌组织中呈低表达水平，其表达水平与组织病理分级和淋巴结转移相关。本研究采用细胞培养的方法，将miRNA-143转染进宫颈癌HeLa细胞，运用荧光定量PCR技术检测转染前后miR-143在宫颈癌HeLa细胞中的表达水平，MTT的方法分析细胞体外增殖情况。我们旨在探索miRNA-143的过表达是否对宫颈癌HeLa细胞的增殖产生影响，研究miR-143在宫颈癌发病机制中的作用。我们的研究为这些miRNA在宫颈癌的基因诊断及分子生物学治疗方面的临床应用提供理论依据。材料与方法1.实验分组设置两个实验组，依据预实验情况转染两个浓度的miR-143mimics。实验A组转染miR-143mimics终浓度为10nmol/L（nM）；实验B组转染miR-143mimics的终浓度为20nmol/L（nM）。共设置三个对照组，转染试剂组对照组加入转染试剂、培养基、和HeLa细胞；空白对照组只含有培养基和HeLa细胞；阴性对照组转人工合成的miR-143阴性对照10nmol/L（nM）。2.实验方法选取宫颈腺癌HeLa细胞系，按以上分组情况采用瞬时转染的方法将人工合成的miR-143模拟体（miR-143mimics）转染进宫颈癌HeLa细胞，体外上调HeLa细胞中miR-143的表达水平。用荧光定量PCR技术检测转染后各组细胞中miR-143的表达情况；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测转染后各组细胞的增殖活性，探讨miR-143对宫颈癌HeLa细胞增影殖的响。采用SPSS17.0统计软件包经行数据统计，数值变量资料以x±s表示，两组间均数比较采用t检验，多组样本细胞增殖率比较采用重复测量资料的方差分析，两组间差异比较采用LSD法。检验水准α=0.05，P <0.05为差异有统计学意义。结果1．转染后与空白对照组相比，实验A组（转染10nM miR-143mimics）与实验B组（转染20nM miR-143mimics）miR-143相对表达量分别为7.38和13.71，各组间差异具有统计学意义(P<0.05)；与转染试剂对照组相比，实验A组与实验B组miR-143的相对表达量分别为4.23和7.86，各组间差异具有统计学意义（P<0.05）。实验B组与实验A组相比，实验B组miR-143相对表达量明显增高，差异有统计学意义（P<0.05）。2．与三对照组相比，实验A组（转染10nM miR-143mimics）与实验B组（转染20nM miR-143mimics）HeLa细胞的增值率下降，差异具有统计学意义（P<0.05）；细胞增殖率从转染后24h开始下降，48h后HeLa细胞增殖率明显下降。实验B组与实验A组相比，实验B组HeLa细胞增殖率下降更明显，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论1．miR-143mimics转染宫颈癌HeLa细胞能够有效的提高miR-143在宫颈癌HeLa细胞中的表达水平。实验A组与实验B组转染miR-143mimics后，HeLa细胞中miR-143的表达水平随着转染浓度的增加而上升。2．上调miR-143在宫颈癌HeLa细胞中的表达水平后，HeLa细胞增殖明显受到抑制，且受抑制程度与转染浓度呈剂量效应关系。3．miR-143在宫颈癌HeLa细胞中表达水平明显降低，其可能发挥了类似抑癌基因的作用。