【摘 要】
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目的:探讨低锰含量Mg-1Mn合金口腔颌面部骨修复材料对SD大鼠的骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）细胞活性及其成骨分化能力的影响。方法:（1）SD大鼠的BMSCs培养:采用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs至第3-4代,使用流式细胞术鉴定BMSCs表型;体外定向分化培养SD大鼠的BMSCs细胞21天后,观察其成骨、成软骨分化的
【基金项目】
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遵义市科学技术局、遵义医科大学附属口腔医院联合科技研发资金项目（遵市科合社字[2018]240号）； 贵州省科技计划项目（黔科合平台人才[2017]5733-057）； 贵州省人才基地建设项目（黔人领发[2018]3号）； 遵义市人才基地建设项目（遵委[2019]69号）；
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目的:探讨低锰含量Mg-1Mn合金口腔颌面部骨修复材料对SD大鼠的骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）细胞活性及其成骨分化能力的影响。方法:（1）SD大鼠的BMSCs培养:采用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs至第3-4代,使用流式细胞术鉴定BMSCs表型;体外定向分化培养SD大鼠的BMSCs细胞21天后,观察其成骨、成软骨分化的潜能。（2）体外实验探讨Mg-1Mn合金骨修复材料对细胞增殖活性的影响。运用间接接触法,制备纯镁与Mg-1Mn合金口腔颌面骨修复材料不同浓度的浸提液,构建起体外细胞增殖、分化成骨的微环境,同时使用电感耦合等离子体发射光谱仪检测不同浓度浸提液中金属离子浓度。（3）将含不同浓度的纯镁与Mg-1Mn合金浸提液的完全培养基与SD大鼠的BMSCs共培养1、4、7天,使用CCK-8试剂盒检测第三代BMSCs的增殖活性,从而分析不同浓度的Mg-1Mn合金浸提液对BMSCs细胞活力的影响。将不同浓度的Mg-1Mn合金浸提液成骨诱导培养基与BMSCs共培养7,14天后,采用碱性磷酸酶测试盒对ALP活力进行定量检测筛选最佳的促成骨分化的浓度。根据上述的研究结果,取SD大鼠的第三代BMSCs细胞与含20%Mg-1Mn合金浸提液的成骨诱导培养基培养7、21天,通过ALP与茜素红染色检测其向成骨方向改变的潜能。（4）选用含20%Mg-1Mn合金浸提液的成骨诱导培养基培养BMSCs 10天,通过应用RT-q PCR分析成骨相关基因（Runx2、ALP、COL-I、OCN、BMP-2、OPG）和Western blot检测成骨相应蛋白（ALP、RUNX-2）的表达来检测其成骨分化的能力。结果:（1）通过全骨髓贴壁法获得原代BMSCs,3-5天在显微镜下可看到细胞在培养瓶瓶底成集落生长;经过传代纯化后,进行扩增培养,细胞形态呈梭形大小一致,生长速度快;流式细胞术结果表明BMSCs高表达MSCs表型,证实所培养的BMSCs属于MSCs;细胞多向分化能力鉴定结果表明茜素红染色结果有大片矿化结节形成,阿利新蓝染色显示为蓝色。（2）ICP-OES结果:纯镁经完全培养基浸泡后释放金属Mg离子,Mg-1Mn合金颌面骨修复材料经完全培养基浸泡后释放金属Mg和Mn离子,Mg-1Mn合金各浓度中释放出的Mg离子浓度均比纯Mg浸提液中的浓度低。证明新型Mg-1Mn合金的耐腐蚀性比纯Mg要高,Mg-1Mn合金颌面骨修复材料具有良好的耐生物腐蚀性能。（3）CCK-8结果:间接接触法实验结果显示Mg-1Mn合金颌面骨修复材料对BMSCs无细胞毒性。其中,BMSCs在Mg-1Mn（1:4）组、Mg-1Mn（1:5）组的合金材料浸提液中表现出较高的细胞增殖活性,五种不同浓度的Mg-1Mn合金浸提液的细胞毒性均在0与1级之间,是合格的骨修复材料;ALP定量检测结果:不同浓度的Mg-1Mn合金成骨诱导液组ALP活性值强于对照组组和普通成骨诱导液组,Mg-1Mn合金成骨诱导浸提液浓度为1:4时,也就是20%Mg-1Mn合金成骨诱导浸提液,成骨能力相对其它浓度较强,且P＜0.05;茜素红染色与碱性磷酸酶染色结果:Mg-1Mn合金颌面骨修复材料的Mg-1Mn（1:4）成骨诱导浸提液组其ALP着色深度与茜素红染色的橘红色钙结节面积及数量要优于普通成骨诱导液组,表明Mg-1Mn合金颌面骨修复材料有良好的成骨能力,有利于骨组织的生长。（4）RT-q PCR与Western blot结果:与空白对照组相比,普通成骨诱导组与Mg-1Mn合金成骨诱导浸提液组的m RNA（Runx2、ALP、COL-I、OCN、BMP-2、OPG）及其相应蛋白（ALP、RUNX-2）的表达明显增高,具有明显差异性,P＜0.05。其中20%Mg-1Mn合金成骨诱导浸提液组要高于普通成骨诱导组。结论:（1）Mg-1Mn合金浸提液对BMSCs无细胞毒性并且能够促进其增殖。（2）Mg-1Mn合金能够促进BMSCs的成骨分化,且体外Mg-1Mn合金的浓度为1:4时是其最佳的促成骨分化浓度。
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