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本文探究了青钱柳叶总黄酮(CPF)对急性肝衰竭(ALF)小鼠的保护作用,并对其抗凋亡机制进行了探讨,为开发青钱柳叶总黄酮作为天然保肝药物提供科学的理论依据。采用微波辅助醇提法提取CPF,通过聚酰胺树脂对粗提物进行纯化,并利用UPLC-DAD-ESI-MS对纯化后的CPF进行结构鉴定。结果显示,纯化后的CPF纯度为72.56%,主要含有异槲皮素、槲皮素-3-O-鼠李糖苷、山奈酚-3-O-鼠李糖苷、槲皮素和山奈酚,其含量分别为2.37%、1.94%、15.77%、4.86%和2.64%。60只雄性昆明小鼠适应性喂养一周后随机分为空白对照组、模型对照组、CPF低、中、高剂量组。CPF低、中、高剂量组分别以100、200和400 mg/kg灌胃,空白组和模型组则以等量的0.5%CMC-Na进行灌胃。连续灌胃一周后,通过腹腔注射LPS(50μg/kg)和D-GalN(800 mg/kg)建立ALF模型。6 h后,采集血液和脏器,检测 MDA、ROS 的含量和 ALT、AST、Caspase-3、GSH-PX 和 T-SOD 的活性。通过HE染色观察肝脏组织的病理变化,并利用TUNEL试验观察肝细胞的凋亡情况。通过Elisa法测定血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的水平,并运用RT-qPCR检测肝脏中TNF-α、IL-1β、IL-6和Caspase-3 mRNA的表达水平。最后利用免疫组化(IHC)和蛋白免疫印迹(WB)检测肝脏中 CD14、TNF-R1、Romo1、Bc1-XL、Nrf2、HO-1、p-IλBα、p-IKKβ和p-p65的表达。结果如下:(1)CPF能够显著降低急性肝衰竭小鼠的死亡率,以及肝脏和脾脏系数(P<0.01)。(2)CPF显著抑制了急性肝衰竭小鼠血清中ALT和AST的活性(P<0.01),以及肝脏中ROS和MDA水平(P<0.01)(3)CPF显著提高了急性肝衰竭小鼠肝脏中GSH-PX、T-SOD的活性(P<0.01),并显著降低了 Caspase-3活性(P<0.01)。(4)CPF显著降低了急性肝衰竭小鼠血清中TNF-α、IL-1 β和IL-6水平(P<0.01),并下调了肝脏中TNF-α、IL-1β、IL-6和Caspase-3 mRNA的表达水平(P<0.01)。(5)CPF显著抑制了急性肝衰竭小鼠肝脏中CD14、TNF-R1、Romo1、p-IκBα,p-IKKβ 和 p-p65 的表达(P<0.01),并提高了 Bcl-XL、Nrf2、和 HO-1 的表达(P<0.01)。(6)HE染色以及TUNEL试验结果显示,CPF明显缓解了急性肝衰竭小鼠肝细胞的损伤,并降低了其凋亡率(P<0.01)。