【摘 要】
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趋化因子受体属于G 蛋白偶联受体(G Protein-Coupling Receptor,GPCR)家族,是一类引人注目的药物靶点,本文通过免疫磁珠快速分选法(MACS)筛选得到受体在细胞表面稳定高表达并
【出 处】
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中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）
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趋化因子受体属于G 蛋白偶联受体(G Protein-Coupling Receptor,GPCR)家族,是一类引人注目的药物靶点,本文通过免疫磁珠快速分选法(MACS)筛选得到受体在细胞表面稳定高表达并且能活化G 蛋白的CHO 细胞,最终建立了CHO-CXCR2、CHO-CXCR3、CHO-CCR3 和CHO-CCR4 细胞系。SPA(scintillation proximity assay)技术广泛用于研究分子之间相互作用,本文利用SPA 技术,建立了快速灵敏、操作简单、可高通量的针对GPCR 的药物筛选模型。主要内容如下:通过SPA 微球的最小化和细胞膜用量、孵育时间等实验条件的优化,建立了SPA-WGA 法[35S]GTPγS 结合实验和SPA-WGA 法配体受体结合实验;由于SPA-WGA 法[35S]GTPγS 结合实验只能检测与Gi/o蛋白偶联的GPCR,而SPA-WGA 法配体受体结合实验无法区别激动剂、拮抗剂和反向激动剂,为了弥补上述方法的局限,建立了SPA-抗体-[35S]GTPγS 结合实验方法。
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