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目的1.从组织水平研究双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶2(Dual Specificity Tyrosine Phosphorylation Regulated Kinase 2,DYRK2)在胶质瘤患者中的表达情况,同时分析胶质瘤组织中DYRK2的表达与临床病理特征的相关性,探讨DYRK2对胶质瘤发生和发展的影响。2.从细胞水平验证DYRK2对胶质瘤细胞迁移中的影响,并探讨DYRK2参与胶质瘤细胞迁移调控的机制。方法1.在组织水平,使用免疫印迹(Western blot,WB)方法检测DYRK2在正常脑组织及胶质瘤组织中的蛋白表达情况。使用免疫组化方法检测在84例胶质瘤病例的石蜡切片中DYRK2与E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达情况,并结合胶质瘤临床病理资料分析DYRK2与胶质瘤患者的年龄、性别、肿瘤的位置、手术方式和WHO分级等因素之间的关系,使用Kaplan–Meier生存曲线分析DYRK2的表达高低对胶质瘤患者预后产生的影响。2.在细胞水平,用WB检测DYRK2在多个胶质瘤细胞株中的蛋白表达情况,分别筛选出表达较低和表达较高的胶质瘤细胞系。在DYRK2表达相对较低的U87细胞中,过表达DYRK2后用WB分别检测E-cadherin、Vimentin和Snail的表达变化;在DYRK2表达相对较高的H4细胞中,干扰DYRK2后用WB分别检测E-cadherin、Vimentin和Snail的表达变化。3.采用划痕试验、transwell实验检测U87细胞中对照组与过表达组、H4细胞中对照组与干扰组的胶质瘤细胞迁移能力,并用WB检测相关信号通路的蛋白的表达,进一步研究DYRK2影响胶质瘤细胞迁移能力的可能机制。结果1.Western blot结果表明,DYRK2在胶质瘤组织中的表达明显低于正常脑组织,并且随着胶质瘤级别的增加,其表达水平逐渐下降。2.免疫组化分析结果显示,DYRK2的在胶质瘤组织中的表达随着级别的增加逐渐减少,且其表达趋势与E-cadherin相一致。相关统计学分析显示,DYRK2的表达只与胶质瘤组织的WHO分级存在统计相关性(P<0.05),而与胶质瘤患者的年龄、性别、肿瘤部位、切除范围、肿瘤大小、有无坏死均没有相关性。Pearson相关分析表明,DYRK2与E-caherin的表达呈正相关(r=0.616,P<0.01)。Kaplan–Meier分析表明,DYRK2表达高的胶质瘤患者与DYRK2表达低的胶质瘤患者相比,总生存率明显增加。3.WB结果显示,在胶质瘤细胞中,E-cadherin的表达趋势与DYRK2一致,Vimentin以及Snail的表达趋势则与DYRK2相反。4.U87细胞中,过表达DYRK2能够抑制细胞的迁移能力;在H4细胞中,干扰DYRK2的表达,会促进细胞迁移。5.WB结果显示,U87细胞中,过表达DYRK2会抑制PI3K、p-AKT和p-GSK3β的表达;H4细胞中,干扰DYRK2的表达能够促进PI3K、p-AKT和p-GSK3β的表达。结论1.在组织水平,DYRK2在胶质瘤组织中呈现低表达并且与胶质瘤的WHO分级有统计相关性;DYRK2的表达高低与胶质瘤患者的预后有关,表明DYRK2的表达异常可能与胶质瘤的进程密切相关。2.在细胞水平,DYRK2可以通过PI3K/AKT/GSK3β通路调节胶质瘤细胞的迁移,DYRK2可能成为胶质瘤治疗的潜在靶点。