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生肌调节因子(Myogenic regulatory factors,MRFs)家族的成员包含四种基因,分别为MRF4,Myf5,Myogenin和MyoD,它们的功能区都具有相似的碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix,bHLH)结构域,是一个螺旋-环-螺旋结构模式(helix-loop-helix motif)及其上游区域富含碱性氨基酸区域(basic region)所组成的结构域。生肌调节因子蛋白以同源或异源二聚体形式与DNA上E-box序列(CANNTG)结合而启动下游肌肉相关基因(如肌球蛋白轻链)的转录。生肌调节因子作为一种转录因子在肌肉的发育分化过程中发挥重要作用。本研究克隆获得了翘嘴鳜生肌调节因子MRF4和Myf5基因cDNA全序列,分析了四种生肌调节因子基因在翘嘴鳜各种组织器官、胚胎发育以及胚后生长发育阶段的表达谱,研究了短期饥饿后再投喂对四种生肌调节因子的表达影响,主要结果如下:1、采用RACE克隆方法,在翘嘴鳜中克隆得到了生肌调节因子MRF4和Myf5的全序列,通过氨基酸序列比对发现,它们在bHLH功能区域都非常保守,该区域由52氨基酸组成。进化树分析发现,翘嘴鳜MRF4和Myf5均与同为鲈形目鮨科的斜带石斑鱼分为一支,说明翘嘴鳜与斜带石斑鱼的亲缘关系最近。2、采用RT-qPCR的方法研究了四种生肌调节因子在翘嘴鳜不同组织器官中的表达情况,研究结果显示,四种生肌调节因子主要分布在红肌和白肌中,且都在白肌中表达最高,除了在肌肉中表达外,在心脏、脑、肝脏、脾脏和肾脏组织器官中也检测到表达。3、采用RT-qPCR的方法研究了四种生肌调节因子在翘嘴鳜胚胎和胚后发育阶段的表达情况,结果显示,胚胎发育阶段四种生肌调节因子基本上都是在原肠胚期开始大量表达,其中MRF4从原肠胚至肌肉效应期呈显著递增趋势(P<0.05)Myf5在体节出现后表达开始下降,到肌肉效应期达到最高表达值;Myogenin和MyoD在尾芽、肌肉效应、出膜期表达显著上调(P<0.05)。胚后发育阶段四种生肌调节因子在肌肉中均检测到表达,且生长在第90 d时表达量最高,到成鱼150 d时表达显著下降(P<0.05)。4、采用RT-qPCR的方法研究了短期饥饿后再投喂对翘嘴鳜四种生肌调节因子表达的影响。实验结果显示,(1)在饥饿后持续喂食14d过程中,MRF4基因从第1d开始持续表达,到7d时表达显著上调,表达值达到最高(P<0.05),14d时恢复到初始水平。而Myf5、Myogenin和MyoD基因在喂食后第1d的表达就出现显著上调(P<0.05),并持续到3d,在5 d时表达又恢复到初始水平,7 d至14 d阶段表达呈递增趋势(P<0.05);(2)短期饥饿后饱食一餐实验结果显示:饱食一餐后翘嘴鳜MRF4、Myogenin和MyoD基因表达开始出现反应上调现象,而Myf5从0 h至3 h,表达呈递减趋势。MRF4在3 h至24 h期间表达基本维持稳定,到48 h表达上调,96h恢复到初始水平;Myf5在第6h表达显著上调(P<0.05),此后的表达开始逐渐下降,到48 h时稳定表达,96 h表达显著下降(P<0.05);Myogenin从1h到12 h表达呈递减趋势,然后再上升至48h表达稳定,96 h又恢复到初始水平;MyoD开始1 h达到最高表达水平,之后表达持续下降至12 h,到24 h时又出现一个表达高峰,之后呈递减趋势(P<0.05)。这一系列结果都将为我们进一步研究翘嘴鳜的肌肉调控机理奠定一定的理论基础。