桥本甲状腺炎患者IncRNA-TMEVPG1变化及对Th1细胞的影响

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目的:  通过研究桥本甲状腺炎患者(Hashimotos thyroiditis,HT)外周血和甲状腺组织中Th1细胞及相关因子表达水平,了解Th1细胞及相关因子在HT发病中的作用;研究长链非编码RNA(lncRNA)-TMEVPG1在HT患者外周血和甲状腺组织中的变化,探讨TMEVPG1对Th1细胞的影响,分析HT患者体内TMEVPG1与Th1细胞、自身抗体水平的关系,初步揭示TMEVPG1在桥本甲状腺炎发病过程中的作用,为HT的诊治提供新思路。  方法:  1、采用流式细胞术(flow cytometer,FCM)检测HT患者与健康志愿者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中Th1细胞(CD3+CD8-IFN-γ+T细胞)比例,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-timepolymerase chain reaction,qRT-PCR)检测HT患者与健康志愿者PBMCs中T-bet和IFNG mRNA表达水平,分析患者PBMCs中T-bet mRNA表达水平与Th1细胞比例相关性,通过qRT-PCR检测HT患者与单纯性甲状腺肿患者甲状腺组织中T-bet和IFNG mRNA表达水平。  2、通过qRT-PCR检测HT患者与健康志愿者PBMCs中TMEVPG1表达情况,分析HT患者PBMCs中TMEVPG1与Th1细胞比例及T-bet、IFNG mRNA相关性,通过qRT-PCR检测HT患者与单纯性甲状腺肿患者甲状腺组织中TMEVPG1表达情况,分析HT患者甲状腺组织中TMEVPG1与T-bet、IFNGmRNA相关性。  3、磁珠分选健康志愿者外周血CD4+T细胞,转染TMEVPG1 siRNA或NC(negative control),采用qRT-PCR检测转染后TMEVPG1和IFNG mRNA水平变化,采用流式细胞术检测转染后CD4+ IFN-γ+T细胞比例变化。  4、应用化学发光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay,CIA)检测HT患者抗甲状腺球蛋白抗体(anti-thyroglobulin antibody,TgAb)和抗甲状腺过氧化物酶抗体(anti-thyroperoxidase antibody,TPOAb)水平,分析患者PBMCs中TMEVPG1与自身抗体水平的相关性。  结果:  1、与健康对照组相比,桥本甲状腺炎患者PBMCs中Th1细胞比例显著增高[(17.96±6.51)%vs(29.14±12.47)%,P<0.001]。HT患者PBMCs中Th1细胞特异性转录因子T-bet mRNA水平显著高于健康志愿者(1.00±0.60 vs0.55±0.23,P<0.01)。HT患者PBMCs中Th1细胞特征性细胞因子IFNG mRNA相对表达量显著高于健康志愿者(1.49±1.56 vs0.53±0.33,P<0.01)。HT患者PBMCs中T-bet mRNA表达水平与Th1细胞比例存在显著正相关(r=0.4590,P=0.0140)。此外,HT患者甲状腺组织中T-bet mRNA表达水平显著高于单纯性甲状腺肿患者(0.34±0.35 vs0.08±0.04, P<0.05),并且HT患者甲状腺组织中IFNG mRNA亦显著高于单纯性甲状腺肿患者(0.73±0.80 vs0.05±0.04,P<0.01)。  2、桥本甲状腺炎患者PBMCs中TMEVPG1表达水平明显高于健康志愿者(2.68±1.82 vs0.84±0.80,P<0.001),且与Th1细胞比例存在显著正相关(r=0.5010,P=0.0066),与T-bet mRNA(r=0.6138, P=0.0005)和IFNG mRNA(r=0.4463,P=0.0173)表达水平亦存在正相关。  3、与单纯性甲状腺肿患者相比,HT患者甲状腺组织中TMEVPG1相对表达量明显增高(0.05±0.05 vs0.97±1.16,P<0.01)。HT患者甲状腺组织中TMEVPG1与T-bet mRNA(r=0.8652, P=0.0012)和IFNG mRNA(r=0.9398, P<0.0001)表达水平呈显著正相关。  4、与转染NC相比,转染TMEVPG1 siRNA的健康人CD4+T细胞中TMEVPG1和IFNG mRNA相对表达量明显降低,CD4+ IFN-γ+T细胞比例明显减少。  5、HT患者PBMCs中TMEVPG1表达水平与TgAb(r=0.4762,P=0.0104)和TPOAb(r=0.3789,P=0.0468)水平呈显著正相关。  结论:  1、HT患者体内Th1细胞比例及相关因子水平增高,且T-bet mRNA表达水平与Th1细胞比例呈显著正相关,提示Th1细胞及相关因子在HT的发生发展中发挥重要作用。  2、HT患者体内TMEVPG1表达水平明显高于健康志愿者,且与Th1细胞比例、特异性转录因子T-bet mRNA及特征性细胞因子IFNG mRNA表达水平均存在显著正相关;体外实验证实,干扰人外周血CD4+T细胞中TMEVPG1水平会引起IFNG mRNA水平和CD4+IFN-γ+T细胞比例明显下调;HT患者体内TMEVPG1的表达水平与患者自身抗体水平存在明显正相关,提示TMEVPG1与HT的发生及疾病进程有关。
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