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背景 骨肉瘤起源于间叶组织,是骨关节系统最常见的恶性肿瘤,其治愈率较低,对青少年健康的危害较高,在早期易发生肺部转移,死亡率较高。近年来,随着外科手术的发展和新辅助联合化疗的广泛应用,患者5年生存率得到显著提高,但发生转移的患者5年生存率仍较低。因此,深入探讨骨肉瘤发生转移机制,寻找新的治疗靶点进而延长已发生转移者的生存期是目前亟需解决的问题。Ski基因在不同物种中广泛参与并调节多种细胞的增殖及分化等过程,在生物进化过程中高度保守,参与多种信号通路,且与肿瘤的发生发展、增殖、分化等密切相关。已有研究表明,Ski基因在多种肿瘤组织中呈高表达状态,Ski基因的激活或异常表达与肿瘤的发生发展密切相关。而有关Ski对骨肉瘤细胞增殖和迁移影响的研究在国内外尚无相关报道。目的 探讨沉默Ski基因骨肉瘤U-2OS细胞是否会出现生物学活性的改变。继而研究骨肉瘤病致病机制并对其早期预防、诊断、治疗提供理论依据。方法 实验分为3组:空白对照组(未转染的骨肉瘤细胞)、阴性对照组(转染阴性对照序列)和沉默组(转染Ski-siRNA)。采用脂质体法将特异性针对Ski基因的siRNA和阴性对照siRNA转入骨肉瘤U-2OS细胞,构建Ski基因沉默表达的骨肉瘤U-2OS细胞系,随后采用蛋白质印迹法验证Ski-siRNA干扰后能否有效降低细胞中Ski蛋白的表达水平;CCK-8法检测沉默Ski表达后骨肉瘤细胞的增殖活力;采用流式细胞术分析细胞周期;采用细胞划痕实验检测Ski-siRNA转染后骨肉瘤U-2OS细胞迁移能力的变化。采用蛋白质免疫印迹法检测沉默Ski基因后对PCNA、CyclinD1和基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达水平的影响。结果 成功构建Ski基因沉默表达的骨肉瘤U-2OS细胞系。Western blot结果显示,Ski-siRNA转染后骨肉瘤U-2OS细胞Ski蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。CCK-8结果表明,Ski-siRNA基因组在12h,24h,48h细胞增殖活力明显降低(P<0.05)。与对照组相比,Ski-siRNA组细胞周期G1期细胞比例明显增高,而S期和G2期细胞比例均显著降低(p<0.05)。细胞划痕实验显示,Ski-siRNA处理组细胞在12、24、48小时的划痕愈合率均低于siRNA对照组,均具有统计学意义(P<0.05),此外,Ski-siRNA处理组中PCNA、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 沉默Ski基因能显著抑制骨肉瘤U-2OS细胞的增殖、迁移能力,提示Ski有望成为骨肉瘤治疗的新靶点。