高产油脂酵母的诱变选育及其油脂发酵的过程优化与调控

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微生物油脂营养价值高、毒副作用小、脂肪酸组成与动植物油类似,可作为良好的廉价原料生产生物柴油,对解决现阶段世界上能源紧缺问题具有重大意义,但目前产油微生物发酵产油能力不足、发酵成本过高等问题限制了其工业化发展进程。本论文基于实验室保藏的油脂酵母Trichosporon dermatis L7,通过菌株诱变、发酵过程强化和发酵工艺优化等手段对促进其产油水平进行了研究。研究内容如下:(1)开展了T.dermatis L7的常压室温等离子体—硫酸二乙酯(ARTP-DES)复合诱变。结合酶标仪检测筛选,实验获得了一株对高渗环境耐受性较好且遗传性稳定的高产油脂菌株G5。该菌株在底物糖浓度为120 g·L-1时,发酵所得生物量和油脂产量达到28.3 g·L-1和15.2 g·L-1,较出发菌株L7分别提高了7%和12%,发酵时间缩短3天。(2)探究了菌株G5的发酵过程强化策略。通过发酵条件优化获得菌株G5摇瓶培养条件为:温度25℃、p H=6、接种量10%(v/v)、装液量50 m L/250 m L、转速200 rpm;确定营养限制的必需营养元素比例为C/N=300、C/P=188、C/S=5682,各添加剂最佳浓度为Mg Cl2 1.12 g·L-1、海藻糖1.15 g·L-1、苹果酸钠0.67 g·L-1、柠檬酸钠0.50 g·L-1、甘油6.0 g·L-1、生物素0.4 mg·L-1;并在接种前加入2%(v/v)的正十二烷作为氧载体形成双液相发酵使发酵时间缩短20%。耦合以上工艺优化和过程强化手段,该菌株发酵9天的生物量、油脂产量和油脂含量分别为33.4 g·L-1、19.4 g·L-1和58%,较优化前分别提高了22%、32%和8%。(3)系统开展了分批补料发酵工艺的优化实验。实验确定发酵的初始葡萄糖浓度为120 g·L-1,并在发酵24 h补加0.5 g·L-1的大豆蛋白胨,在发酵第4天采用间歇递减补料方式补加葡萄糖,补料浓度依次为30 g·L-1、20 g·L-1、10 g·L-1,发酵12天所获得生物量、油脂产量和油脂含量达到了50.1 g·L-1、28.4 g·L-1和57%;进一步在7-L发酵罐中进行验证,选择在第4天进行间歇递减式补料,发酵10天所获得生物量、油脂产量和油脂含量分别为64.9 g·L-1、37.0 g·L-1、57%,生物量和油脂产量较罐上分批发酵相比提高了50%和52%。论文通过菌种选育和发酵工艺优化调控等有效手段强化了油脂酵母发酵能力,显著提高了油脂酵母生长和发酵积累油脂水平,为微生物油脂发酵工业化应用提供技术借鉴。
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