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目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞与中性粒细胞共培养后,中性粒细胞对T细胞免疫的影响,并探索其分子机制,以及共培养诱导后的中性粒细胞对小鼠4T1肿瘤进展的影响。方法:(1)通过体外分离培养与提纯小鼠骨髓间充质干细胞,骨髓中性粒细胞。(2)通过体外共培养体系,Annexin-V-PI标记,流式细胞仪检测中性粒细胞凋亡情况。(3)体外共培养后中性粒细胞影响T细胞增殖实验:通过Anti-CD3抗体刺激T淋巴细胞增殖,并用CFSE检测其增殖率,同时检测部分T细胞激活Marker(CD25、CD69、CD62L、CD44)。(4)采用基因芯片和RT-PCR研究处理组和未处理组转录水平情况。检测各组中性粒细胞精氨酸酶1活性水平。(5)小鼠体内注射共培养的中性粒细胞与4T1小鼠肿瘤细胞建造肿瘤模型,记录肿瘤体积生长趋势。结果:(1)通过CD45、CD11b双阴选,CD11b、 Ly-6G双阳选分别能够得到所需间充质干细胞、中性粒细胞。(2)共培养后中性粒细胞的生存时间更长,凋亡率减少。(3)在体外经过MSC处理的PMN能够抑制T淋巴细胞的增殖和激活。(4)共培养组精氨酸活性上调,转录水平上iNOS、 saa3、IL-10、IL-10R等免疫抑制基因上调。(5)肿瘤模型示实验组4T1肿瘤体积增长比对照组迅速。结论:(1)在体外小鼠骨髓间充质干细胞能促进中性粒细胞的存活,减少凋亡。(2)在体外经过共培养后的中性粒细胞,可能经Arginase1、iNOS介导抑制T淋巴细胞的分裂增殖反应。(3)在转录水平上,共培养后的中性粒细胞与未处理组呈现较多差异, iNOS、saa3、IL-10、IL-10R等上调。(4)小鼠4T1肿瘤模型示共培养后的中性粒细胞促进肿瘤进展。