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目的：检测超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(Staphylococcal Enterotoxin B,SEB)体外活化的小鼠淋巴细胞的免疫耐受功能,探讨该细胞对小鼠高危角膜移植免疫排斥反应的防治作用。
方法：无菌取C57BL/J小鼠脾脏淋巴细胞,制备成5×106/ml的混悬液,分别与SEB和刀豆蛋白A(ConA)体外共培养,MTT法测定细胞增殖。非特异性耐受特征的研究使用体外培养第3天的细胞,吸出上清后添加二次抗原刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2),继续培养3 d,MIT法测定细胞对二次抗原的应答反应能力。用流式细胞仪测定SEB和ConA体外活化的淋巴细胞在第0、6天时的CD4+CD25+调节性T细胞和CD3+NK1.1+NKT细胞百分比。以BALB/c小鼠为供体,C57BL/J小鼠为受体,建立小鼠高危角膜移植动物模型,术后分为A实验组、B对照组,并分别于结膜下注射0.05ml生理盐水或相同体积的培养6天的SEB活化的淋巴细胞悬液(浓度1×106个细胞/ml),术后观察记录植片的存活状况,并进行组织病理学检查和免疫组织化学检测。
结果： SEB和ConA均能活化小鼠淋巴细胞并使其增殖。培养后的淋巴细胞中CD3+NK1.1+NKT细胞和CD4+CD25+调节性T细胞含量比培养前升高。SEB活化的淋巴细胞对ConA、LPS和IL-2的二次应答反应能力降低,细胞增殖的OD570nm值由一次应答反应的0.43±0.07分别下降到0.19±0.01、0.14±0.02和0.15±0.04(P<0.01)。治疗组角膜植片平均存活时间(mean survival time,MST)为28.60±3.75d,而生理盐水组为22.13±4.91d,两者比较有显著的统计学差异(P<0.05)。HE染色显示对照组植片中度水肿,角膜基质纤维板层结构排列紊乱,大量炎性细胞浸润,植片中可见新生血管。而在治疗组植片仅轻度增厚,基质板层纤维排列规则,未见炎性细胞浸润及新生血管长入。免疫组织化学染色显示治疗组小鼠角膜植片中CD4+和CD8+淋巴细胞数量较对照组明显减少。
结论：超抗原SEB活化的小鼠淋巴细胞具有免疫耐受功能,能够明显延长小鼠高危角膜移植植片的存活时间,其机制可能与上调了CD3+NK1.1+NKT+和CD4+CD25+调节性T细胞有关。