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【目的】
1.观察不同时间点盲肠结扎穿孔模型对小鼠组织的影响。
2.比较手术后不同时间点,厄洛替尼(erlotinib)在盲肠结扎穿孔模型中的效果,制作HE染色病理切片,运用WesternBlot、RT-PCR技术予以验证。
3.探讨在厄洛替尼在小鼠肺部炎症中相关机制中的作用。
【方法】
54只8-10周龄雄性昆明小鼠随机分为假手术组(NC组)、盲肠结扎穿孔组(CLP)和厄洛替尼(erlotinib)组,每组18只,分别在手术前2h给药,NC组和CLP组,予以captisol(厄洛替尼溶剂)行灌胃,厄洛替尼组予以captisol+erlotinib行灌胃。2h后,NC组行开腹+缝合术,CLP组与erlotinib组行开腹+盲肠结扎穿孔+缝合术。上述3组,分别在手术后的6、12、24h,处死取小鼠肺部组织,每个时间点各6只;制作HE染色病理切片,运用WesternBlot检测EGFR、P-EGFR、AKY、P-AKT、erk、p-erk、p38、p-p38、TLR4、caveloin-1、P-caveloin-1、caveloin-3蛋白的表达,运用RT-PCR检测TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、IL-8mRNA表达。
【结果】
1.HE染色病理切片:NC组肺部组织在术后6、12、24h,均无明显改变;CLP组肺部组织在术后6h无明显改变,12h后支气管上皮腺体细胞大量增生,支气管粘膜水肿,肺间质部分炎症细胞浸润,部分肺组织实变,24h后支气管上皮正常结构测底破坏,肺间质严重水肿,肺泡上皮弥漫粉红色颗粒,炎症浸细胞润,肺组织实变。
2.WesternBlot:1)术后6h,CLP组与NC组相比,TLR4、caveloin-3、P-caveloin-1蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05),erlotinib组与CLP组相比,P-EGFR、P-erk、P-P38、TLR4、P-caveloin-1蛋白表达量减少,差异均有统计学意义(P<0.05);2)术后12h,CLP组与NC组相比,P-EGFR、P-AKT、TLR4、P-P38、P-caveloin-1、caveloin-3蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05),erlotinib组与CLP组相比,P-EGFR、P-AKT、P-erk、P-P38、TLR4、P-caveloin-1、caveloin-3蛋白表达量减少,差异均有统计学意义(P<0.05);3)术后24h,CLP组与NC组相比,P=EGFR、p-erk、p-P38、TLR4、P-caveloin-1、caveloin-3蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05),erlotinib组与CLP组相比,P-AKT、TLR4、caveloin-3蛋白表达量减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。
3.RT-qPCR:1.术后6h,CLP组与NC组相比,TNF-ɑ、IL-1β、IL-6mRNA表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05),erlotinib组与CLP组相比,TNF-ɑ、IL-1β、IL-6mRNA蛋白表达量减少,差异均有统计学意义(P<0.05);2.术后12h,CLP组与NC组相比,TNF-ɑ、IL-1β、IL-6mRNA表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05),erlotinib组与CLP组相比,TNF-ɑ、IL-1β、IL-6mRNA蛋白表达量减少,差异均有统计学意义(P<0.05);3.术后24h,CLP组与NC组相比,TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、IL-8mRNA表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05),erlotinib组与CLP组相比,IL-1β、IL-8mRNA表达量减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。
【结论】
1.盲肠结扎穿孔脓毒症模型可造成急性肺损伤。
2.厄洛替尼可以降低早期急性肺损伤的损伤程度,具有一定保护作用,超过24h后,作用效果较差。
1.观察不同时间点盲肠结扎穿孔模型对小鼠组织的影响。
2.比较手术后不同时间点,厄洛替尼(erlotinib)在盲肠结扎穿孔模型中的效果,制作HE染色病理切片,运用WesternBlot、RT-PCR技术予以验证。
3.探讨在厄洛替尼在小鼠肺部炎症中相关机制中的作用。
【方法】
54只8-10周龄雄性昆明小鼠随机分为假手术组(NC组)、盲肠结扎穿孔组(CLP)和厄洛替尼(erlotinib)组,每组18只,分别在手术前2h给药,NC组和CLP组,予以captisol(厄洛替尼溶剂)行灌胃,厄洛替尼组予以captisol+erlotinib行灌胃。2h后,NC组行开腹+缝合术,CLP组与erlotinib组行开腹+盲肠结扎穿孔+缝合术。上述3组,分别在手术后的6、12、24h,处死取小鼠肺部组织,每个时间点各6只;制作HE染色病理切片,运用WesternBlot检测EGFR、P-EGFR、AKY、P-AKT、erk、p-erk、p38、p-p38、TLR4、caveloin-1、P-caveloin-1、caveloin-3蛋白的表达,运用RT-PCR检测TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、IL-8mRNA表达。
【结果】
1.HE染色病理切片:NC组肺部组织在术后6、12、24h,均无明显改变;CLP组肺部组织在术后6h无明显改变,12h后支气管上皮腺体细胞大量增生,支气管粘膜水肿,肺间质部分炎症细胞浸润,部分肺组织实变,24h后支气管上皮正常结构测底破坏,肺间质严重水肿,肺泡上皮弥漫粉红色颗粒,炎症浸细胞润,肺组织实变。
2.WesternBlot:1)术后6h,CLP组与NC组相比,TLR4、caveloin-3、P-caveloin-1蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05),erlotinib组与CLP组相比,P-EGFR、P-erk、P-P38、TLR4、P-caveloin-1蛋白表达量减少,差异均有统计学意义(P<0.05);2)术后12h,CLP组与NC组相比,P-EGFR、P-AKT、TLR4、P-P38、P-caveloin-1、caveloin-3蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05),erlotinib组与CLP组相比,P-EGFR、P-AKT、P-erk、P-P38、TLR4、P-caveloin-1、caveloin-3蛋白表达量减少,差异均有统计学意义(P<0.05);3)术后24h,CLP组与NC组相比,P=EGFR、p-erk、p-P38、TLR4、P-caveloin-1、caveloin-3蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05),erlotinib组与CLP组相比,P-AKT、TLR4、caveloin-3蛋白表达量减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。
3.RT-qPCR:1.术后6h,CLP组与NC组相比,TNF-ɑ、IL-1β、IL-6mRNA表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05),erlotinib组与CLP组相比,TNF-ɑ、IL-1β、IL-6mRNA蛋白表达量减少,差异均有统计学意义(P<0.05);2.术后12h,CLP组与NC组相比,TNF-ɑ、IL-1β、IL-6mRNA表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05),erlotinib组与CLP组相比,TNF-ɑ、IL-1β、IL-6mRNA蛋白表达量减少,差异均有统计学意义(P<0.05);3.术后24h,CLP组与NC组相比,TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、IL-8mRNA表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05),erlotinib组与CLP组相比,IL-1β、IL-8mRNA表达量减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。
【结论】
1.盲肠结扎穿孔脓毒症模型可造成急性肺损伤。
2.厄洛替尼可以降低早期急性肺损伤的损伤程度,具有一定保护作用,超过24h后,作用效果较差。