粘质沙雷氏菌是人和动物的重要条件致病菌,除可引起人肺部、尿道和血液的感染等,也可引起昆虫、爬行类、鱼类、禽类、哺乳类动物的感染致病。本试验研究了来自患呼吸道疾病肉牛血液（ZZCCN01）和患乳房炎奶牛奶样（ZZCNJ01、ZZCNJ02、ZZCNJ03、ZZCNJ04）共5株粘质沙雷氏菌的生物特性、耐药特性、小鼠致病性等,并构建了粘质沙雷氏菌的PCR检测方法,旨在为临床上牛源粘质沙雷氏菌的检测及防治提供参考。1.牛源粘质沙雷氏菌的培养特性及16S r DNA和gyr B序列分析菌落形态分析发现ZZCCN01不产生色素,在普通营养琼脂培养基、血液琼脂培养基、麦康凯培养基和SS培养基上均为白色菌落,在伊红美蓝培养基上为淡紫色菌落;ZZCNJ01不产生色素,菌落形态与ZZCCN01一致;ZZCNJ02、ZZCNJ03和ZZCNJ04可产生色素,37℃培养时在普通营养琼脂培养基上菌落中央呈淡红色、边缘呈乳白色,28℃培养时在普通营养琼脂培养基上为橙黄色菌落,在兔血琼脂培养基上呈金黄色菌落,在麦康凯培养基上呈鲜红色菌落,在伊红美蓝培养基上为微带金属光泽的紫黑色菌落,在SS培养基上为粉红色菌落。生化试验结果显示ZZCCN01半乳糖、山梨醇试验均为阴性,ZZCNJ01半乳糖、山梨醇试验为阳性;ZZCNJ02、ZZCNJ03和ZZCNJ04半乳糖为阴性、山梨醇为阳性。16S r DNA和gyr B序列的系统发育树显示ZZCNJ02、ZZCNJ03和ZZCNJ04之间的同源性为100%,与ZZCCN01和ZZCNJ01分别处于三个不同的分支。2.牛源粘质沙雷氏菌的耐药性及耐药基因的检测采用纸片琼脂扩散法研究5株牛源粘质沙雷氏菌对27种常见抗菌药物的耐药性。根据亚胺培南、多西环素、链霉素敏感性试验结果可知,ZZCNJ02、ZZCNJ03和ZZCNJ04药物敏感性结果一致,与ZZCCN01、ZZCNJ01均不同。同时,5株牛源粘质沙雷氏菌表现出对头孢唑林、阿莫西林、氨苄西林、苯唑西林、美罗培南、亚胺培南等β-内酰胺类药物耐药或低敏感性。通过β-内酰胺类耐药基因检测发现仅OXA-58基因的检测结果为阳性,其余基因如KPC、SME、VIM、IMI、GES、CTX-M、NDM-1、OXA-23、OXA-48、acr A、acr B、Mex B和Mex R的检测结果均为阴性。3.牛源粘质沙雷氏菌对小鼠的致病性研究通过人工感染小鼠试验,测定5株牛源粘质沙雷氏菌对小鼠的LD50,并从临床症状、眼观病理变化、细菌学检查和组织病理学四个方面探讨其致病性。经腹腔注射感染小鼠后,小鼠出现精神沉郁、呼吸急促等临床症状。剖解死亡小鼠可见心、肝、脾和肺出现不同程度的淤血,且从脑、心、肝、脾、肺、肾和血液中分离得到相应的试验菌株,表明小鼠的死亡与其引起的菌血症有关。病理组织学分析显示脾脏轻微淤血、脾小结扩张,其他器官如心、肝、肺的病变均较为轻微。ZZCCN01、ZZCNJ01、ZZCNJ02、ZZCNJ03和ZZCNJ04对小鼠LD50分别为2.5×108CFU/m L、1.25×108CFU/m L、2.483×107CFU/m L、4.416×107CFU/m L、8.831×107CFU/m L。4.粘质沙雷氏菌PCR检测方法的建立与应用根据高保守性的Lux S基因筛选出一对特异性引物（Lux S-F3:5’-AAGGACGCGAGACCACTC-3’,Lux S-R3:5’-TCGCCGTCCAACACTTCC-3’）,按2×Taq DNA Master Mix 12.5μL、上下游引物各（10μmol/L）1μL、DNA模板2μL、dd H2O 8.5μL,总体积为25μL的反应体系;95℃5min;95℃40s,63℃30s,72℃40s,35个循环后72℃延伸10min,可获得约640bp的特异性条带,其DNA的最低检出限为1.13×10-3μg/m L。利用该方法对80份患呼吸道疾病肉牛的口鼻腔拭子和48份患乳房炎奶牛的奶样进行了检测,4份奶样样本检测阳性,与传统细菌分离鉴定结果符合率为100%。结论:1)牛源粘质沙雷氏菌在进化过程中,其培养、生化及耐药特性,以及致病力等也在发生适应性变化。奶牛乳房炎和肉牛呼吸道综合征菌血症的发生是否与此有关,以及牛源粘质沙雷氏菌是否会成为多种动物（包括人类）潜在感染的风险致病菌等,尚值得进一步研究。2)成功建立了粘质沙雷氏菌的特异性PCR检测方法,可应用于临床样品中牛源粘质沙雷氏菌的快速检测。