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猪细小病毒样颗粒(Recombinant Parvovirus-like Particles，PPV-VLPs)保留了天然病毒的空间构象和诱导中和抗体的抗原表位，且能够将外源型猪瘟病毒E290基因片段插入形成嵌合型猪细小病毒样颗粒(PPV-VLPs-E290)，但PPV-VLPs-E290作为外源性抗原，被提呈进入MHCⅠ类分子途径，并激活CTL反应的机制目前尚不明确。为了探明该机制，本研究在已经成功构建了猪细小病毒样颗粒(PPV-VLPs-E290)的基础上，将动物体内抗原提呈功能最强、也是唯一能激活初始T淋巴细胞的树突状细胞(DC)作为抗原提呈细胞，对PPV-VLPs-E290在DC细胞中的定位、捕获以及提呈情况进行了研究。 为了探明猪细小病毒样颗粒(PPV-VLPs-E290)在树突状细胞(DC)中的定位情况，本研究首先通过磁性筛选的方法从猪的脾脏分离CD172a+ CD11R+ DC，将PPV-VLPs-E290用荧光素FITC标记后，体外与DC在37℃下作用，应用流式细胞仪检测在体外DC对PPV-VLPs的捕获情况。结果显示，FITC阳性细胞的比例为72％左右，表明DC在体外能有效捕获PPV-VLPs-E290。捕获PPV-VLPs-E290的DC用皂苷透化后，分别与内吞体的表面标志分子Rab5、Rab7、Rab11、Lamp2单克隆抗体及PE标记的PPV-VP2抗体反应，通过共聚焦显微镜检测PPV-VLPs-E290在DC中的定位情况。结果显示，PPV-VLPs可与晚期内吞体相关蛋白分子Lamp2及Rab7的单抗共定位，而与Rab5、Rab11不共定位，表明PPV-VLPs被DC捕获后，定位于DC的晚期内吞体。 为了探明猪脾树突状细胞(DC)捕获猪细小病毒样颗粒的方式，DC首先经低渗和钾离子缺乏处理先与抑制DC细胞不同提呈途径的药物如氯丙嗪、二甲基氨基吡咪、松胞素D、菲律平等分别在37℃下作用1h后，再与荧光素FITC标记的猪细小病毒样颗粒(FITC-PPV-VLPs-E290)在37℃下作用4h，应用流式细胞仪及共聚焦显微镜检测在体外DC对PPV-VLPs的捕获情况。结果显示，钾离子缺乏及氯丙嗪对DC的捕获效率无影响，而经二甲基氨基吡咪、菲律平及松胞素D处理的DC对PPV-VLPs-E290捕获效率明显下降。表明DC对PPV-VLPs-E290的捕获与肌动蛋白、巨胞饮及小窝蛋白介导的方式有关，而与网格蛋白介导的方式无关。 为了进一步对DC捕获FITC-PPV-VLPs-E290的方式进行鉴定，本研究又将DC与DC捕获抗原各个不同途径中的关键因素抗体如:肌动蛋白抗体，小窝蛋白caveolin-1抗体、猪IgG受体FcγRI(CD64)的抗体及DEC205抗体分别在37℃下作用1h后，再与FITC-PPV-VLPs-E290在37℃下作用1h，应用流式细胞仪及共聚焦显微镜检测体外DC对FITC-PPV-VLPs-E290的捕获情况。结果显示，经肌动蛋白抗体处理的DC几乎不能捕获FITC-PPV-VLPs-E290，经caveolin-1的抗体处理的DC对PPV-VLPs-E29的捕获效率明显下降。而CD64及DEC205抗体则对DC的捕获效率无影响，进一步表明DC对PPV-VLPs-E290的捕获依赖于肌动蛋白，与巨胞饮、小窝蛋白介导的内吞方式有关，而与吞噬作用及DEC205依赖的网格蛋白介导的方式无关。 为了检测PPV-VLPs-E290在DC中被DC摄取后的提呈情况。本研究通过磁性筛选的方法从猪瘟疫苗免疫猪的脾脏分离CD4-CD8+T细胞。DC先分别与伯氨喹、放线菌酮、氯喹、乳胞素、布雷菲德菌素A及亮抑肽酶、胃酶抑素作用，再与PPV-VLPs-E290在37℃作用4h，然后与CD4-CD8+T细胞共孵育，制备效应细胞，利用细胞毒性杀伤实验检测PPV-VLPs-E290在DC中的提呈情况。结果显示，放线菌酮、氯喹、乳胞素、布雷菲德菌素A(BFA)可强烈抑制DC对PPV-VLPs-E290提呈，胃酶抑素部分抑制，而经伯氨喹、亮抑肽酶处理的DC对PPV-VLPs-E290的提呈则不受影响。这些结果表明，DC对PPV-VLPs-E290的有效提呈需要新蛋白的合成，尤其是MHCⅠ类分子的合成。且晚期内吞体的酸性环境及蛋白酶体水解均参与了PPV-VLPs-E290的提呈。