类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）是以中晚期滑膜增生和进行性关节破坏为特征的慢性自身免疫性疾病。活化的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RASF）的增殖是滑膜增生和骨破坏的直接原因。我们之前的研究发现酸敏感离子通道1a（ASIC1a）调控RASF活化以响应细胞外酸性微环境。然而,ASIC1a在RASF增殖中的作用仍不清楚。本文在体内和体外研究了ASIC1a对RASF增殖的影响及其分子机制。我们发现ASIC1a在p H 6.0酸性环境中促进RASF的增殖,并在佐剂性关节炎（AA）大鼠中被阻断时减少大鼠滑膜增生和骨损伤。ASIC1a在p H 6.0的酸性环境中激活典型的Wnt/β-catenin信号通路,从而上调原癌基因c-Myc的表达并介导RASF的增殖。综上所述,本研究揭示了ASIC1a作为一种酸敏感离子通道,通过Wnt/β-catenin/c-Myc通路促进RASF增殖,提示ASIC1a可能是RA潜在的治疗靶点。目的:本研究旨在探讨酸活化的ASIC1a对RASF增殖的作用,并探讨其在RA中的病理生理意义。方法:1.体外酸刺激对RASF增殖的影响给予RASF不同时间点体外p H 6.0酸刺激,采用Ed U、CCK-8以及细胞生长曲线来探究RASF增殖现象。利用Western blotting检测增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达水平。2.ASIC1a在人类风湿性关节炎滑膜组织中的表达使用Western blotting及q-PCR实验对人类风湿性关节炎滑膜组织与人正常滑膜组织中ASIC1a的表达量进行探究。利用流式细胞术对提取分离的细胞进行鉴定。3.酸刺激激活ASIC1a对RASF增殖的作用使用ASIC1a-si RNA或慢病毒来将RASF中的ASIC1a基因沉默或过表达,通过western blotting和q-PCR分析ASIC1a的表达水平,检测沉默或过表达效果。采用Western blotting检测对照组、加酸刺激组、沉默ASIC1a组、过表达ASIC1a组、ASIC1a特异性抑制剂（Pc Tx-1）组中ASIC1a、PCNA的蛋白表达水平。利用Ed U细胞增殖实验探究不同处理下RASF的增殖变化。4.Wnt/β-catenin通路在ASIC1a调控的RASF增殖中的作用使用Western blotting、q-PCR、免疫荧光实验探究各组中Wnt/β-catenin通路的靶基因β-catenin和c-Myc蛋白表达。利用Western blotting、免疫荧光实验探究体外酸刺激对β-catenin核积累的影响。进一步的实验中,采用Wnt/β-catenin通路抑制剂（xav939）来处理RASF,通过Western blotting、q-PCR、免疫荧光实验探究β-catenin、c-Myc以及PCNA的表达水平。利用Ed U细胞增殖实验探究不同处理下RASF的增殖变化。5.阻断ASIC1a通道对AA大鼠体内滑膜组织增殖的影响构建佐剂型关节炎AA大鼠,注射Pc Tx-1后,检测大鼠体重变化、足肿胀度、并利用关节炎评分细则对AA大鼠关节炎症进行评分。采用HE染色、甲苯胺蓝染色、免疫组化实验探究ASIC1a通道阻断后,AA大鼠体内滑膜组织的增殖状况。结果:1.体外p H 6.0酸刺激促进RASF增殖;2.ASIC1a在类风湿性关节炎滑膜组织内表达较人正常滑膜组织高;3.酸刺激可以通过激活ASIC1a调控RASF增殖,沉默或过表达ASIC1a后,细胞增殖指标蛋白PCNA表达水平明显下调或上调,RASF生长能力也随之减弱或增加。4.ASIC1a表达减少或增加后,Wnt/β-catenin通路靶基因β-catenin和c-Myc的表达随之减少或增加。使用Wnt/β-catenin通路抑制剂后,体外酸化诱导的RASF增殖现象减少。5.阻断ASIC1a通道抑制AA大鼠滑膜组织增殖。结论:1.酸化微环境诱导RASF增殖2.酸感受器ASIC1a通过调控Wnt/β-catenin/c-Myc通路促进RASF增殖。