论文部分内容阅读
在卵母细胞和精细胞中存在一类组蛋白H2A和H2B的组蛋白变体,初步研究表明这些组蛋白变体参与早期胚胎基因组的形成,调节早期胚胎的染色体结构、基因表达,在早期胚胎重编程中发挥重要作用。本实验主要以H2A、H2B以及其变体TH2A、TH2B为研究对象,研究它们在过表达情况下对小鼠早期胚胎发育的影响。我们采用PCR技术克隆了小鼠H2A、H2B以及它们的变体TH2A和TH2B全长基因,并将它们分别克隆到pGEM-T载体,通过DNA序列分析与NCBI基因库中的基因比较,证明我们所获得的H2A、H2B、TH2A和TH2B是小鼠的H2A、H2B、TH2A和TH2B的全长基因。然后,把所得的这四个基因分别克隆到pEGFP-C2真核细胞表达载体,将外源基因置于CMV启动子的下游,以便应用于体细胞的表达。为了在小鼠早期受精卵中表达这些组蛋白基因,我们又分别把H2A、H2B、TH2A和TH2B基因克隆到pSP64 poly(A)载体,利用SP6 RNA聚合酶分别合成H2A、H2B、TH2A和TH2B基因的mRNA,最后通过显微注射方法分别将H2A/H2B或TH2A/TH2B的mRNAs注射到小鼠原核期的胚胎中,研究H2A/H2B或TH2A/TH2B在过表达条件下对小鼠早期胚胎发育的影响。结果表明,在体外培养90小时后,注射H2A/H2BmRNAs胚胎的囊胚发育率为34.37%,显著低于对照组(43.92%,P<0.05),说明在小鼠胚胎发育过程中过表达H2A/H2B对小鼠胚胎早期发育有抑制作用;而注射TH2A/TH2B mRNAs胚胎的囊胚发育率为76.12%,显著高于对照组(43.92%,P<0.05)以及注射H2A/H2B胚胎组(34.37%,P<0.05),该结果表明在小鼠胚胎发育过程中,过表达组蛋白变体TH2A/TH2B可促进小鼠早期胚胎发育。因此,我们的实验结果表明H2A/H2B和TH2A/TH2B对早期胚胎发育具有不同的作用,这些结果对体细胞克隆以及建立iPSc提供了参考价值。