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目的:探索二氢杨梅素对实验性结肠炎小鼠肠黏膜屏障的作用及可能的机制。方法:将50只C57BL/6小鼠随机分为五组:正常对照组,葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)组,DSS+20mg/kg DHM(二氢杨梅素)组,DSS+40mg/kg DHM组,柳氮磺吡啶(Salazosulfapyridine,SASP)组。正常对照组自由饮用PBS 7天,其余各组自由饮用由PBS配制的2.5%DSS溶液7天,之后正常对照组及DSS组给予PBS灌胃7天,余各组分别给予不同浓度DHM或SASP灌胃治疗7天,共14天。期间每天记录各组小鼠大便性状、体重、便血等情况计算DAI,第15天水合氯醛麻醉后采集门静脉血,颈椎脱臼法处死小鼠,收集各组小鼠结肠组织。运用HE(Hematoxylin and eosin)染色法检测小鼠肠道组织损伤情况;通过免疫组化的方法检测紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-2、Occludin的表达水平;采用TUNEL检测试剂盒和免疫印迹的两种方法检测肠道细胞凋亡数量及凋亡相关蛋白BAX、Bcl-2、Caspase-3表达水平;通过检测小鼠门静脉血中细菌的活力反应DHM对DSS引起的结肠炎小鼠肠黏膜屏障完整性的保护作用;检测小鼠外周血中FITC-dextran浓度进一步反应DHM对结肠炎小鼠肠粘膜屏障功能的保护作用。体外培养大鼠肠上皮细胞株IEC6细胞,实验分为四组:正常对照组,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组(350ug/mL),LPS+DHM组(0.5ug/mL),DHM组(0.5ug/mL)。对照组细胞使用完全培养基培养72小时,DHM组及LPS组细胞分别用含0.5ug/mL DHM、350ug/mL LPS作用72小时,LPS+DHM组细胞用含0.5ug/mLDHM+350ug/ml LPS处理72小时。反转录酶-聚合酶链反应(Reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测炎性因子IL-6和IL-1β的分泌。结果:DHM可以改善结肠炎小鼠症状,降低小鼠疾病活动指数(Disease activity index,DAI)。HE染色结果提示DHM可以保护DSS引起的小鼠肠道组织结构破坏,组织学评分示:与对照组相比,DSS组小鼠组织学评分显著增高(p<0.001),20mg/kg、40mg/kg DHM和SASP均能降低组织学评分(p<0.001)。与SASP组相比,20mg/kg DHM组或40mg/kg DHM组无统计学意义(p>0.05)。TUNEL染色检测肠道组织凋亡细胞数目并定量分析结果示:对照组小鼠肠组织存在少量凋亡细胞,与对照组相比,DSS组凋亡细胞显著增多(p<0.001),20mg/kg、40mg/kg DHM和SASP均能减少凋亡的细胞(p<0.001)。免疫印迹法检测凋亡相关蛋白BAX、Bcl-2、Caspase3的表达水平,结果示:BAX表达水平在各组之间无统计学差异,DSS引起结肠炎小鼠肠组织Bcl-2(p<0.001)蛋白表达降低水平而Caspase3(p<0.01)表达水平增高,20mg/kg、40mg/kg DHM和SASP可以促进Bcl-2但降低Caspase3的表达(p<0.001)。免疫组织化学法检测小鼠肠道组织紧密连接蛋白的表达结果提示:与对照组相比,DSS可以导致小鼠紧密连接蛋白ZO-1和Occludin表达降低和Claudin-2表达增加,结果具有统计学意义(p<0.05)。与DSS组相比,40mg/kg DHM可以增加ZO-1和Occludin的表达水平(p<0.001),20mg/kg DHM可以增加ZO-1并降低Claudin-2的表达水平(p<0.05),SASP仅能降低Claudin-2的表达(p<0.05)。结肠炎小鼠门静脉血中细菌活力检测结果示:和对照组相比,DSS组小鼠门静脉血中细菌活力(p<0.001)及数量(p<0.01)较对照组相比显著增加,和DSS组相比,20mg/kg、40 mg/kg DHM可以降低DSS结肠炎小鼠门静脉血中细菌数量,且结果具有统计学意义(p<0.05),尽管SASP也可以降低结肠炎小鼠门静脉血中细菌数量,但与对照组相比,无统计学意义(p>0.05)。与对照组相比,DSS组小鼠门静脉血中FITC-dextran浓度增加(p<0.01),20 mg/kg DHM可以降低DSS结肠炎小鼠门静脉血中FITC-dextran含量(p<0.001)。MTT检测DHM对IEC6增殖结果示:高剂量(10 ug/mL、5 ug/mL、2 ug/mL、1 ug/mL)DHM明显抑制肠上皮细胞增殖,低剂量(0.5 ug/mL、0.25 ug/mL、0.125ug/mL、0.0625 ug/mL)则无影响。MTT实验检测LPS对IEC6增殖的影响,结果示:LPS浓度与IEC6增殖无线性关系,300 ug/mL、350 ug/mL、500 ug/mL LPS对IEC6增殖率的抑制作用明显强于400 ug/mL和450 ug/mL LPS,IC50为357.7ug/mL。RT-PCR实验法检测LPS对IEC6炎性因子分泌的影响,结果提示LPS引起IEC-6的炎性因子IL-6和IL-β分泌量显著增加(p<0.001),DHM可降低IL-1β的分泌(p<0.01)。)结论:DHM可以减轻结肠炎小鼠肠道炎症;其机制可能与减少炎性因子分泌、维持肠黏膜屏障完整性相关,DHM有可能成为治疗结肠炎的一种候选药物。