【摘 要】
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目的:观察半胱氨酸天冬氨酸酶3（caspase-3）抑制剂（Z-DEVD-fmk）对体外循环（CPB）后血浆所孵育的储存红细胞（sRBC）的保护作用方法:1.CBP不同时间点血浆的制备:选取CPB下行瓣膜置换手术患者8例（n=8）,在CPB前经中心静脉导管取血7mL,CPB 2h再次取血20mL,离心后分别得到CPB前、后血浆备用。2.sRBC分组及预处理:取储存时间在7-14天的sRBC14mL
【基金项目】
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国家自然科学基金（81860083）；
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目的:观察半胱氨酸天冬氨酸酶3（caspase-3）抑制剂（Z-DEVD-fmk）对体外循环（CPB）后血浆所孵育的储存红细胞（sRBC）的保护作用方法:1.CBP不同时间点血浆的制备:选取CPB下行瓣膜置换手术患者8例（n=8）,在CPB前经中心静脉导管取血7mL,CPB 2h再次取血20mL,离心后分别得到CPB前、后血浆备用。2.sRBC分组及预处理:取储存时间在7-14天的sRBC14mL均分为A、B、C、D 4组,每组3.5mL。A、B组sRBC分别加入30μL NS,C组sRBC加入30μL 10%二甲基亚砜（DMSO）稀释液,D组sRBC加入30μL浓度为3.5m M的Z-DEVD-fmk溶液。4组sRBC均于37℃静置2h进行预处理。3.sRBC与CBP前后血浆孵育:A组sRBC与等体积的CPB前血浆孵育;B、C、D组sRBC均与等体积的CPB 2h后血浆孵育,四组均孵育48h。4.被孵育的sRBC分别于2h、24h、48h,用ELISA法检测其caspase-3活性和三磷酸腺苷（ATP）含量,比色法检测还原型谷胱甘肽（GSH）含量、流式细胞术检测sRBC膜上磷脂酰丝氨酸（PS）暴露率、比色法检测孵育液中游离血红蛋白（FHb）的含量。结果:1.孵育不同时间各组sRBC的caspase-3活性变化情况:孵育2h时,A组sRBC的caspase-3活性明显低于B组和C组（P＜0.01）,但与D组无统计学差异（P＞0.05）;B、C、D三组之间无统计学差异（P＞0.05）。孵育24h、48h时,A组sRBC的caspase-3活性明显低于B、C、D三组（P＜0.01）;B组与C组无统计学差异（P＞0.05）;D组sRBC的caspase-3活性明显低于C组（P＜0.01）。2.孵育不同时间各组sRBC的ATP含量变化情况:孵育2h时,各组间sRBC的ATP含量无统计学差异（P＞0.05）。孵育24h、48h时,A组sRBC内ATP含量明显高于B、C、D三组（P＜0.01）;B组与C组无统计学差异（P＞0.05）;D组sRBC的ATP含量明显高于C组（P＜0.01）。3.孵育不同时间各组sRBC的GSH含量变化情况:孵育2h时,A组sRBC的GSH含量明显高于B、C、D三组（P＜0.01）;B、C、D三组之间无统计学差异（P＞0.05）。孵育24h、48h时,A组sRBC内GSH含量明显高于B、C、D三组（P＜0.01）;B组与C组无统计学差异（P＞0.05）;D组sRBC内GSH含量明显高于C组（P＜0.01）。4.孵育不同时间各组sRBC膜上PS暴露率的变化情况:孵育2h时,A组sRBC膜上PS暴露率明显低于B、C、D三组（P＜0.01）;B、C、D三组之间无统计学差异（P＞0.05）。孵育24h、48h时,A组sRBC膜上PS暴露率明显低于B、C、D三组（P＜0.05）;B组与C组无统计学差异（P＞0.05）;D组sRBC膜上PS暴露率明显低于C组（P＜0.01）。5.孵育不同时间各组孵育液中FHb浓度的变化情况:孵育2h时,A组孵育液中FHb浓度明显低于B、C、D三组（P＜0.01）;B、C、D三组之间无统计学差异（P＞0.05）。孵育24h、48h时,A组孵育液中FHb浓度明显低于B、C、D三组（P＜0.01）;B组与C组无统计学差异（P＞0.05）;D组孵育液中FHb浓度明显低于C组（P＜0.05）。结论:1.CPB后患者的血浆对sRBC有损伤作用。2.Z-DEVD-fmk对CPB后血浆所孵育的sRBC具有保护作用。
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