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目的:研究透明质酸(hyaluronic acid, HA)对人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)增殖的影响并阐明其作用机制。 方法:采用二步两酶消化法分离 hAMSCs;运用流式细胞术和免疫细胞化学染色法鉴定hAMSCs;采用CCK法检测细胞增殖;采用免疫荧光染色法检测蛋白的表达及分布;采用RT-qPCR分析基因的转录水平;采用western blot法检测蛋白的表达。 结果:HA不影响hAMSCs的细胞表面标志物的表达。HA可有效促进hAMSCs增殖,且呈剂量依赖性。在0.6 mg/mL最适剂量下,相对增殖率达到131.9％。在60h范围内,0.6 mg/mL HA呈时间依赖促进hAMSCs增殖,且在36h时,细胞增殖核抗原Ki-67基因的转录水平显著提高。但增殖细胞核抗原PCNA基因及蛋白的表达水平无显著变化。免疫荧光染色结果提示,HA能促进Wnt通路中关键调控因子β-catenin蛋白的表达,并集中分布于细胞核内。western blot实验结果也显示,HA处理使β-catenin蛋白的表达明显上调。RT-qPCR实验结果显示, hAMSCs在HA处理后, Wnt通路相关的40个基因转录水平均有一定程度的变化,但是无论HA处理与否,hAMSCs细胞中均未检测到wnt7a、wnt7b、wnt9b、wnt10b和wnt16等基因。进一步的结果提示,HA能促进Wnt通路中β-catenin、Wnt1、Wnt3a、Wnt8a、cyclin D1、和Ki-67等基因的表达明显上调,其中Wnt3a基因在加药早期上调最为明显。CCK检测结果显示,Wnt通路阻断剂Dkk-1能显著抑制HA的促进hAMSCs增殖的效应。 结论:HA是hAMSCs增殖的促进剂,其可能经由激活Wnt/β-catenin信号通路,促进hAMSCs的增殖。