流式细胞术在临床检验中的应用研究

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  【摘要】:目的  探究临床检验中应用流式细胞术的作用价值。方法  在2019年1月-2019年12月中采用多次严谨性的实验来分析实验数据,确保实验的真实性、严谨性,通过资料回顾性分析,总结临床检验中流式细胞术的可行性。结果  最终实验数据显示,在临床检验中应用流式细胞术,可以有效检验淋巴细胞亚群、肿瘤标志物、HLA-B27抗原、临床微生物。结论  临床检验应用流式细胞术的价值显著,现已在多個医学领域中得到应用。
  【关键词】流式细胞术;临床检验;应用价值
  流式细胞术是借助流式细胞仪实现单细胞的定量分选、分析技术,该技术可以在短时间内分析数以万计的细胞,在每个细胞中获取的参数具有多样性,将其应用于临床检验中,具有方便快捷、高精度、准确性佳的优势。现阶段在临床上流式细胞术可以检测受染细胞内部、表面的病毒抗体,但是由于流失细胞术检测多是单细胞,因此在进行受染细胞检测时具有一定的局限性,多将其用于血液标本、尿液标本、灌洗液(支气管)标本的检验中[1]。在整个检验的过程中,需要开展DNA-RNA的荧光标记工作,将蛋白探针、代谢的活性呈现出来,作为细胞定量分析最为先进的技术,现已成为临床检测的重要组成部分。本文重点探究临床检验中应用流式细胞术的作用价值,以供有关人士参考,现将报道数据整理如下。
  1.资料与方法
  1.1一般资料
  本文研究开展时间为2019年1月-2019年12月,在该时间段内收集流式细胞术的临床检验资料,依据资料收集结果发现,流式细胞术检验技术为细胞分选、细胞定量分析,其用于实验的细胞有很多,如肾上皮细胞、骨肉瘤细胞、乳腺癌细胞等。此次研究的实验进行获得了伦理委员会的批准。
  1.2方法
  首先,检验医师需要进行细胞培养,其涉及到的工作步骤包括铺板、细胞转染、细胞分板放置、样本上机制备、药物刺激、细胞获得、细胞处理、试剂配制等。在这个操作过程中,需要对细胞的数量加强控制,确保每瓶的细胞数在1X107之下,在细胞计数之前需要在铺板环节分化细胞,如果所计数的细胞存在高密度的情况,为了确保计数的准确性,需要用试剂来稀释细胞,使细胞倍数合理。具体在铺板时需要在培养皿中置于合适数量的细胞,然后需要晃动培养皿,避免细胞出现聚集的情况,确保其分布的均匀性,在晃动培养皿时要注意以水平为方向,并且要注意动作的轻柔性,以免培养液洒出,在完成上述工作后,将培养箱作为细胞的盛放容器,对细胞进行转染。
  在细胞的转染环节,首要操作是选择适宜的染色剂,然后需要借助载体将基因质粒构建出来,当前临床常用的载体为DEF-FN,在转染之前需要检查细胞密度,只有密度值在50%-60%之间时才可以开展转染,当转染时长超过12小时,需要以1:3的比例将细胞分板,在分板时主要以细胞密度为依据,确保最终的细胞密度处于30%[2]。
  在选择阳性对照物时,主要有两种,即转染质粒、药物处理细胞等,细胞铺板超过1天,开展药物刺激,培养1天后对获取的细胞进行处理,在收集培养液这一过程中,需要将适宜剂量的胰酶加入到相应规格板中,等待期消化完全后再开展胰酶的中和工作。在上述工作结束后,需要间隔4小时以上在冰箱等储存容器中取出细胞样本,之后用1XPBS进行清洗与混合,并将其置于水浴锅中进行半小时的避光处理,从而有效完成细胞样本的制备工作中。
  处理分选样本时,需要在细胞贴壁处进行相关的培养,在培养环节选择细胞板规格在10cm,之后要充分消化培养酶,在细胞脱壁后,应该选择5ml左右的培养液进行中和处理,确保细胞分散的均匀性,与此同时,需要进行转染效率的测定工作,以测定结果为依据,合理选择分选模式,对细胞浓度进行合理的调节,确保上样速率的数值在每秒1000-3000个。
  2.结果
  本文调查结果显示,流式细胞技术应用优势体现在同时在单个细胞中获取多个参数,定量对受染细胞进行检验,准确测定样本中存在的病毒、病毒抗原,现阶段流式细胞技术常用于淋巴细胞亚群、肿瘤标志物、HLA-B27抗原、临床微生物等方面。
  3.讨论
  肿瘤标志物的检测主要是分析患者是否存在细胞癌变,主要是在检测时,对肿瘤细胞DNA进行染色处理,分析其含量,掌握细胞增值能力,以其为依据对治疗方案进行科学的制定。HLA—B27基因主要分析患者是否患有关节炎、脊柱炎,借助流式细胞术进行检验,需要采用CD3/HLA抗体,先将T淋巴细胞亚群测定出来,之后分析细胞表面HLA—B27的组织抗原,临床微生物检测有助于科学选取抗病菌药物,降低细胞的耐药性,主要是在检测的过程中应用荧光染料,依据发光轻度来判断。
  综上所述,流式细胞术在临床检验中广泛应用于淋巴细胞亚群、肿瘤标志物、HLA-B27抗原、临床微生物等方面,有利于疾病的诊断与治疗,因此流式细胞术值得临床进一步应用与推广。
  参考文献:
  [1]李文波,李文华. 流式细胞术在临床检验中的应用探究[J]. 影像研究与医学应用,2018,2(19):219-220.
  [2]王师,张孟源,童能胜,张火兵. 流式细胞术在临床检验中的应用[J]. 检验医学与临床,2017,14(06):897-898+902.
  作者简介:李必生,男,1969年7月出生,四川南充人,汉族,本科,副主任技师,现为河北省医学遗传学会委员
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