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目的 探讨凝血因子Ⅸ(FⅨ)Arg327Ile(R327I)突变导致血友病B的分子发病机制.方法 在野生型FⅨ表达质粒FⅨWTpcDNA3.1(-)的基础上,定点突变法构建FⅨ R327I、R327Ala(A)、R327Lys(K)和R327Asn(N)突变的表达质粒,重叠PCR构建FⅨ324～329(β折叠结构域)换成FⅦ298～303同源结构突变表达质粒[FⅨβFⅦ pcDNA3.1(-)].将野生型及各种突变体表达质粒分别瞬时转染胚肾293T细胞,一期法检测培养上清液中FⅨ活性(FⅨ∶C)及ELISA法检测细胞培养上清和细胞裂解液中FⅨ抗原(FⅨ∶Ag),Western blot法检测突变蛋白的相对分子质量及表达水平.荧光蛋白表达载体瞬时转染法检测活细胞中突变蛋白合成与分泌.结果 体外瞬时转染FⅨR327I突变基因的细胞FⅨ∶C为正常野生型的4.49%,细胞上清液和细胞裂解液FⅨ∶Ag水平分别为野生型的31.02%和129.29%,为交叉反应减低型(CRMR).活细胞免疫荧光观察发现FⅨR327I突变蛋白在细胞内含量较野生型显著增高,并且在细胞溶酶体内的含量较野生型也显著增多.FⅨR327A、R327K、R327N及FⅨβFⅦ突变基因转染的细胞FⅨ∶C水平较野生型减低,其中以FⅨβFⅦ突变降低最为明显;转染的细胞培养上清FⅨ∶Ag水平除R327K突变型较野生型增加,其余突变型均比野生型有不同程度的降低.Western blot法检测显示各种突变蛋白的相对分子质量与野生型相同而表达水平降低.结论 FⅨR327I突变基因可影响蛋白质合成和分泌,R327位点与FⅨ功能特异有关,其所在的β折叠结构域在FⅨ特异性功能中发挥重要作用。