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【摘要】肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)是一种具有多种生物活性的细胞因子,在正常情况下血清中存在较低水平的TNF-α,某些病理状态TNF-α水平升高。本文采用酶联免疫吸附法定量检测脑梗塞患者发作期及治疗期血清中TNF-α的含量的变化研究,以探讨TNF-α与脑梗塞发病的关系,指导治疗,减少病残率。
【关键词】脑梗塞;肿瘤坏死因子;血清;酶联免疫吸附测定
【中图分类号】R743.33【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)10-006-1
1材料与方法
1.1研究对象:病例组选取2009年4月至2009年12月我院住院治疗的急性脑梗塞患者48例,其中男性28例,女性20例,年龄在54～66岁,平均年龄60±6岁;另取体检正常人群30例做对照,其中男性16例,女性14例,年龄在55～65岁,平均年龄60±5岁。病例组入选标准:均符合2008年全国第八届脑血管病学术会议修订的诊断标准,并经头颅CT或头颅MRI证实病灶存在。须具备以下条件:①首次患急性脑梗塞,发病在12h以内。②必须是住院患者;入院时体温正常,无明确的炎症症状。③NIHSS评分在5～23分之间。病例组和对照组的排除标准:①近两周患有感染性疾病;②伴发恶性肿瘤;③伴有自身免疫性疾病;④伴有严重的心、肝、肾脏疾病及血液系统疾病。
1.2研究方法
1.2.1主要试剂:为TNF-α ELISA试剂盒。
1.2.2标本采集:患者血清标本分别来自以上48例急性脑梗塞患者,正常人血清标本30例作为对照。患者入院治疗前抽取空腹静脉血2ml,室温下静置2小时后,用低温离心机离心血液标本取上清(10℃ 2000转/分、10分钟),分装于EP管中,溶栓及治疗后7天分别再次采集标本,方法同上。所有血清置于-70℃低温保存待检。
1.2.3实验方法:血清TNF-α含量的ELISA检测。严格按照试剂盒说明书操作,根据标准浓度曲线计算出样品TNF-α含量,结果以ug/L表示。
1.2.4统计学方法:数据输入计算机,采用SPSS10.0软件进行处理。数据以x±s表示,组间比较用t检验、单因素方差分析。P<0.05为差异有显著性。
2结果
急性脑梗塞发作期TNF-α含量明显高于治疗期(P<0.01),急性发作期和治疗期明显高于正常对照组(P<0.01),结果见表1。
表1 各组血清TNF-α比较(x±s,CB/ug.L-1)
组别例数 TNF-α
正常对照组3087.58±10.87
脑梗塞急性期 48 156.63±15.46﹡△
脑梗塞治疗期 48 110.56±16.87﹡
﹡P<0.01与正常对照组比较△P<0.01与脑梗塞治疗期比较(t检验)
3讨论
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)主要是由激活的巨噬细胞分泌的一种多肽类物质,它具有广泛生物学功能,包括抗肿瘤、抗感染、促进组织修复等重要作用,在许多疾病中参与重要的病理生理作用。
近年来的研究表明,TNF-α主要通过以下方式对中枢神经系统(CNS)产生影响:①外周TNF-α通过神经介质作用于CNS或通过受损的BBB(血脑屏障)进入CNS;②外周细胞进入CNS产生TNF-α;③CNS多种细胞成分,如脉络丛室管膜细胞、血管内皮细胞、活化星形胶质细胞、小胶质细胞及神经元等,在不同刺激/损伤下产生TNF-α。脑梗塞患者有白细胞聚集和浸润的病理现象。这种继发于脑缺血的炎症过程对损伤程度有影响。TNF-α可影响血管内皮细胞活性并对血管炎症过程起调节作用。有研究认为TNF-α参与脑梗塞发病的病理生理机制可能是:(1)增加内皮细胞组织因子的合成释放,抑制组织纤溶酶原激活物的释放及诱导纤溶酶原激活物抑制剂-1的分泌而抑制纤溶反应,下调血栓调解素的表达,从而抑制具有抗凝作用的蛋白C激活,并刺激内皮细胞释放白介素-1(IL-1),而IL-1具有促进血栓形成作用,TNF-α与IL-1协同作用使内皮细胞表面成为促凝状态,促进血栓形成。(2)TNF-α可影响血管舒缩活性物质的表达。脑梗塞时TNF-α增加,还伴有前列腺素(PGT2)、TXB2产生等增加。这些因子除影响血凝过程外,还可促成血管舒缩因子的下降和内皮素(ET)的增加引发血管收缩,增加局部卒中的危险性。(3)脑缺血后2～7d,TNF-α刺激成纤维细胞。成胶质细胞和星形细胞表达神经生长因子,有助于缺血改善和神经元生存。缺血后7～30d,通过巨噬细胞和胶质细胞产生丝氨酸激酶、微管蛋白-2激酶等,参与损伤组织吸收、修复和重塑。TNF-α参与了脑梗塞患者炎症/免疫反应发生发展过程。有研究结果显示脑梗塞患者血中TNF的增高,使得内皮细胞和白细胞上的粘附分子[ICAMs]表达增强,进而使血液中白细胞与血管内皮细胞之间的粘附作用加强。白细胞粘附于微血管内皮表面,一方面可使机械性堵塞循环通道,影响组织的血液供应另一方面活化的白细胞可释放大量的毒性氧自由基蛋白水解酶,损害局部血管,导致血管通透性加强,造成脑组织水肿,活化的白细胞透过受损的血管壁向缺血区移行,可进一步释放上述毒性物质,破坏幸存的神经元和胶质细胞,从而加重神经组织损伤。
本试验表明脑梗塞急性期血清TNF-α含量明显高于治疗期,两者比较有显著性差异(P<0.01);而治疗期患者血清TNF-α含量明显高于正常对照组,两者比较有显著性差异(P<0.01)。提示TNF-α是参与急性脑梗塞病理生理机制中的关键介质之一,参与急性脑梗死的炎症免疫过程,所以,能在脑梗塞进程中有效地降低TNF-α含量,可减少病残率。
参考文献
[1] 刘盂元.细胞因子在神经内分泌免疫调节网络中的作用[J].国外医学·免疫学分册,1993,6(5):239.
[2] Barone F C,Arvin B,White RF,et al.Tumor necrosis factor-alpha:a mediator of focal ischemic brain injury[J].Stroke,1997,28(6):1233-1234.
[3] 刘立.局灶性脑缺血早期过程中的炎症及其损伤作用[J].国外医学·脑血管病分册,1996,4(1):3.
[4] 杨金升.肿瘤坏死因子在脑卒中时表达及作用[J].国外医学·脑血管病分册,1996,4(2):77.
【关键词】脑梗塞;肿瘤坏死因子;血清;酶联免疫吸附测定
【中图分类号】R743.33【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)10-006-1
1材料与方法
1.1研究对象:病例组选取2009年4月至2009年12月我院住院治疗的急性脑梗塞患者48例,其中男性28例,女性20例,年龄在54～66岁,平均年龄60±6岁;另取体检正常人群30例做对照,其中男性16例,女性14例,年龄在55～65岁,平均年龄60±5岁。病例组入选标准:均符合2008年全国第八届脑血管病学术会议修订的诊断标准,并经头颅CT或头颅MRI证实病灶存在。须具备以下条件:①首次患急性脑梗塞,发病在12h以内。②必须是住院患者;入院时体温正常,无明确的炎症症状。③NIHSS评分在5～23分之间。病例组和对照组的排除标准:①近两周患有感染性疾病;②伴发恶性肿瘤;③伴有自身免疫性疾病;④伴有严重的心、肝、肾脏疾病及血液系统疾病。
1.2研究方法
1.2.1主要试剂:为TNF-α ELISA试剂盒。
1.2.2标本采集:患者血清标本分别来自以上48例急性脑梗塞患者,正常人血清标本30例作为对照。患者入院治疗前抽取空腹静脉血2ml,室温下静置2小时后,用低温离心机离心血液标本取上清(10℃ 2000转/分、10分钟),分装于EP管中,溶栓及治疗后7天分别再次采集标本,方法同上。所有血清置于-70℃低温保存待检。
1.2.3实验方法:血清TNF-α含量的ELISA检测。严格按照试剂盒说明书操作,根据标准浓度曲线计算出样品TNF-α含量,结果以ug/L表示。
1.2.4统计学方法:数据输入计算机,采用SPSS10.0软件进行处理。数据以x±s表示,组间比较用t检验、单因素方差分析。P<0.05为差异有显著性。
2结果
急性脑梗塞发作期TNF-α含量明显高于治疗期(P<0.01),急性发作期和治疗期明显高于正常对照组(P<0.01),结果见表1。
表1 各组血清TNF-α比较(x±s,CB/ug.L-1)
组别例数 TNF-α
正常对照组3087.58±10.87
脑梗塞急性期 48 156.63±15.46﹡△
脑梗塞治疗期 48 110.56±16.87﹡
﹡P<0.01与正常对照组比较△P<0.01与脑梗塞治疗期比较(t检验)
3讨论
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)主要是由激活的巨噬细胞分泌的一种多肽类物质,它具有广泛生物学功能,包括抗肿瘤、抗感染、促进组织修复等重要作用,在许多疾病中参与重要的病理生理作用。
近年来的研究表明,TNF-α主要通过以下方式对中枢神经系统(CNS)产生影响:①外周TNF-α通过神经介质作用于CNS或通过受损的BBB(血脑屏障)进入CNS;②外周细胞进入CNS产生TNF-α;③CNS多种细胞成分,如脉络丛室管膜细胞、血管内皮细胞、活化星形胶质细胞、小胶质细胞及神经元等,在不同刺激/损伤下产生TNF-α。脑梗塞患者有白细胞聚集和浸润的病理现象。这种继发于脑缺血的炎症过程对损伤程度有影响。TNF-α可影响血管内皮细胞活性并对血管炎症过程起调节作用。有研究认为TNF-α参与脑梗塞发病的病理生理机制可能是:(1)增加内皮细胞组织因子的合成释放,抑制组织纤溶酶原激活物的释放及诱导纤溶酶原激活物抑制剂-1的分泌而抑制纤溶反应,下调血栓调解素的表达,从而抑制具有抗凝作用的蛋白C激活,并刺激内皮细胞释放白介素-1(IL-1),而IL-1具有促进血栓形成作用,TNF-α与IL-1协同作用使内皮细胞表面成为促凝状态,促进血栓形成。(2)TNF-α可影响血管舒缩活性物质的表达。脑梗塞时TNF-α增加,还伴有前列腺素(PGT2)、TXB2产生等增加。这些因子除影响血凝过程外,还可促成血管舒缩因子的下降和内皮素(ET)的增加引发血管收缩,增加局部卒中的危险性。(3)脑缺血后2～7d,TNF-α刺激成纤维细胞。成胶质细胞和星形细胞表达神经生长因子,有助于缺血改善和神经元生存。缺血后7～30d,通过巨噬细胞和胶质细胞产生丝氨酸激酶、微管蛋白-2激酶等,参与损伤组织吸收、修复和重塑。TNF-α参与了脑梗塞患者炎症/免疫反应发生发展过程。有研究结果显示脑梗塞患者血中TNF的增高,使得内皮细胞和白细胞上的粘附分子[ICAMs]表达增强,进而使血液中白细胞与血管内皮细胞之间的粘附作用加强。白细胞粘附于微血管内皮表面,一方面可使机械性堵塞循环通道,影响组织的血液供应另一方面活化的白细胞可释放大量的毒性氧自由基蛋白水解酶,损害局部血管,导致血管通透性加强,造成脑组织水肿,活化的白细胞透过受损的血管壁向缺血区移行,可进一步释放上述毒性物质,破坏幸存的神经元和胶质细胞,从而加重神经组织损伤。
本试验表明脑梗塞急性期血清TNF-α含量明显高于治疗期,两者比较有显著性差异(P<0.01);而治疗期患者血清TNF-α含量明显高于正常对照组,两者比较有显著性差异(P<0.01)。提示TNF-α是参与急性脑梗塞病理生理机制中的关键介质之一,参与急性脑梗死的炎症免疫过程,所以,能在脑梗塞进程中有效地降低TNF-α含量,可减少病残率。
参考文献
[1] 刘盂元.细胞因子在神经内分泌免疫调节网络中的作用[J].国外医学·免疫学分册,1993,6(5):239.
[2] Barone F C,Arvin B,White RF,et al.Tumor necrosis factor-alpha:a mediator of focal ischemic brain injury[J].Stroke,1997,28(6):1233-1234.
[3] 刘立.局灶性脑缺血早期过程中的炎症及其损伤作用[J].国外医学·脑血管病分册,1996,4(1):3.
[4] 杨金升.肿瘤坏死因子在脑卒中时表达及作用[J].国外医学·脑血管病分册,1996,4(2):77.