【摘 要】
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研究目的1.筛选在肝癌中低表达、与血管侵袭相关且于肝癌外泌体中富集的miRNA:miR-30a-3p;2.研究miR-30a-3p对肝癌外泌体分泌、侵袭和转移的影响;3.探讨miR-30a-3p调控肝癌外泌体分泌、侵袭和转移的分子机制。研究内容和方法1.筛选在肝癌中低表达、与血管侵袭相关且于肝癌外泌体中富集的miRNA。1)使用 TCGA 数据库和 GEO 数据集 GSE 36915,GSE 54
【基金项目】
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国家自然科学基金（81773008;81672756）；
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研究目的1.筛选在肝癌中低表达、与血管侵袭相关且于肝癌外泌体中富集的miRNA:miR-30a-3p;2.研究miR-30a-3p对肝癌外泌体分泌、侵袭和转移的影响;3.探讨miR-30a-3p调控肝癌外泌体分泌、侵袭和转移的分子机制。研究内容和方法1.筛选在肝癌中低表达、与血管侵袭相关且于肝癌外泌体中富集的miRNA。1)使用 TCGA 数据库和 GEO 数据集 GSE 36915,GSE 54751,GSE 21362和GSE 67140筛选在肝癌中表达下调并与血管侵袭相关的miRNAs;2)筛选在肝癌外泌体中富集的miRNA。2.研究miR-30a-3p对肝癌细胞外泌体分泌、侵袭和转移的影响。1)通过在肝癌细胞系SK-Hep-1和SMMC-7721中转染miR-30a-3p的mimics 来过表达 miR-30a-3p;2)miR-30a-3p过表达后,通过电子显微镜和纳米颗粒追踪分析（NTA）检测无血清培养基中肝癌细胞所分泌外泌体的形态、粒径和浓度;3)miR-30a-3p过表达后,Transwell试验检测肝癌细胞的侵袭和转移能力。3.探讨miR-30a-3p调控肝癌外泌体分泌、侵袭和转移的分子机制。1)利用网站 TargetScan、miRanda 和 miPathDB 预测出 SNAP23 可能是miR-30a-3p 的靶基因;2)过表达miR-30a-3p后,通过Western blot、qRT-PCR实验检测SNAP23的蛋白、mRNA水平;3)通过双荧光素酶实验证明了 SNAP23是miR-30a-3p的直接靶基因;4)进一步的机制研究证明miR-30a-3p通过靶向SNAP23来调控肝癌细胞的外泌体分泌、侵袭和转移。结果1.miR-30a-3p在肝癌组织与肝癌细胞中低表达,而在肝癌外泌体中高表达。1)筛选在TCGA数据库以及GEO数据集GSE 36915,GSE 54751,GSE 21362和GSE 67140 中均下调的miRNAs:hsa-mir-130a,hsa-miR-30a-3p;2)miR-30a-3p在肝癌组织与肝癌细胞中低表达;3)miR-30a-3p在肝癌细胞外泌体中高表达。2.miR-30a-3p能抑制肝癌细胞的外泌体分泌、侵袭和转移。1)与Scramble组相比,过表达miR-30a-3p后肝癌细胞系SK-Hep-1和SMMC-7721的外泌体分泌明显减少;2)与Scramble组相比,miR-30a-3p过表达后,肝癌细胞的侵袭和转移受到抑制。3.miR-30a-3p直接靶向SNAP23下调其表达,进而抑制了肝癌细胞的外泌体分泌、侵袭和转移。1)过表达miR-30a-3p使SNAP23的蛋白、mRNA水平下调;利用双荧光素酶实验进一步证明了 SNAP23是miR-30a-3p的直接靶基因;2)过表达SNAP23能够逆转过表达miR-30a-3p对肝癌细胞外泌体分泌、侵袭和转移的抑制作用。结论miR-30a-3p在肝癌组织与肝癌细胞中低表达,而在肝癌外泌体中高表达;过表达miR-30a-3p能抑制肝癌细胞的外泌体分泌,侵袭和转移;机制研究表明,miR-30a-3p通过直接靶向SNAP23来抑制肝癌细胞的外泌体分泌、侵袭和转移。
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