近年来,microRNA(miRNA)已经成为一类重要的疾病标志物。实时荧光定量反转录PCR(RT-qPCR)是目前应用最广泛的mi RNA检测技术之一,然而,由于mi RNA序列短、含量低、种类多,PCR检测中的引物通常需要复杂的设计或化学修饰以稳定引物与探针之间或引物之间的杂交。为解决上述问题,本文将末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)引入RT-qPCR体系,我们发现TdT能以RNA为引发物聚合出长链DNA,利用这一特性将mi RNA延伸,再结合反转录PCR扩增技术,可达到对mi RNA灵敏而特异的检测,无需复杂的探针修饰,具体研究内容如下:利用琼脂糖凝胶电泳和荧光标记变性PAGE等手段对RNA引发的TdT聚合性质进行验证,结果表明TdT能以RNA为引发物,以脱氧核糖核苷酸(dNTPs)为底物合成DNA且利用不同种类d NTPs进行延伸的效率存在差异。将RNA引发的TdT聚合反应与RT-qPCR结合开发出了新型miRNA检测方法,即先利用TdT将miRNA延伸,再利用随机引物和特异性引物进行反转录扩增。结果表明该方法对于microRNA-122(miR-122)的检测灵敏度可达到200 zmol,特异性良好;利用该方法验证了对乙酰氨基酚过量导致肝损伤生物标志物miR-122含量上调的现象。此外,设计了以单一dNTP为底物的TdT介导的反转录PCR,进一步探究了RNA引发体系中TdT对四种dNTP的延伸,并将其应用于核酸定量中。综上所述,本文发现了末端转移酶的RNA引发性质并进行了验证,成功构建了基于末端转移酶介导的反转录PCR方法并将其应用于miR-122的检测。本研究在末端转移酶的应用及疾病标志物的检测等方面有着巨大的潜在价值。