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小牛血六肽（Calf blood hexapeptide,DECB-6P）是由注射用小牛血去蛋白提取物（DECB）分离纯化获得的小分子活性肽。DECB是一种多组分生化药,其注射剂在使用方面受到限制。本论文在本课题组前期研究DECB获得小分子活性肽DECB-6P基础上,进一步研究其对脑卒中的作用机制。具体进行了以下几个方面研究:1.DECB-6P对细胞及促进血管生成的作用采用CoCl2诱导HUVECs细胞构建OGD模型,当CoCl2溶液浓度为25μg/m L时,HUVECs细胞存活率为61.1%,损伤适中设为建模浓度。采用MTT测定法,检测在OGD模型中经过DECB-6P处理后的HUVECs细胞增殖程度,实验结果表明,当DECB-6P溶液浓度为80μM时,细胞存活率恢复到92.41%,DECB-6P对HUVECs细胞OGD模型具有修复作用。利用细胞迁移实验进一步说明DECB-6P对细胞生长的影响,其结果表明:DECB-6P对细胞迁移有促进作用,迁移率达100.9%。采用鸡胚卵黄膜和尿囊膜作为观察新生血管模型,实验结果显示,DECB-6P浓度为320μM时,鸡胚卵黄膜血管密度增长97.50%,血管个数增长212.5%,尿囊膜血管密度增长78.66%,血管个数增长78.38%,具有明显的促进血管生成作用。2.DECB-6P对缺血性脑卒中的影响（1）采用小鼠MCAO/R模型,研究DECB-6P对于缺血性脑卒中的影响,通过TTC染色和HE染色评价DECB-6P对大脑梗塞面积恢复、海马神经细胞的影响。实验结果表明:TTC染色后与MCAO/R模型组相比,阳性药物（EGBLI）给药组、DECB-6P给药组和DECB-6P与EGBLI联合给药组均促进梗塞面积的恢复,梗塞面积恢复分别为40.16%、57.41%、61.06%,联合组梗塞面积恢复效果最为明显。进一步对小鼠进行行为神经功能缺损评分,其中EGBLI给药组、DECB-6P给药组和联合给药组行为学评分别为3.5分,3.18分和2.78分,联合给药组行为学能力恢复效果最为明显。在海马区以及皮层的HE染色图像中,与模型组相比,EGBLI给药组、DECB-6P给药组和联合给药组的细胞坏死明显减少,其中DECB-6P给药组海马区细胞形态接近正常,联合组趋于正常。（2）采用Western Blot方法,研究了DECB-6P通过HIF-1α/VEGF通路改善小鼠缺血性脑卒中梗塞面积恢复的作用机制。实验结果表明,与模型组相比EGBLI对VEGF/β-actin没有影响,DECB-6P对VEGF/β-actin影响很大为39.73%,联合给药降低了DECB-6P对VEGF的作用,为27.29%。与模型组相比DECB-6P给药组、EGBLI给药组、联合给药组HIF-1α/β-actin分别增加30.96%、77.41%、114.57%。针对HIF-1α/β-actin通路,联合用药更有效,比较单用EGBLI,机制上药效提高3倍以上,更有助于促进大脑血管的发生,恢复梗塞面积。（3）采用DPPH检测法、SOD/MDA检测法,检测了DECB-6P的抗氧化活性,以及DECB-6P对MCAO/R小鼠氧化应激指标的影响。结果表明,DECB-6P溶液浓度为160μM时,抗氧化活性最为明显为75.8%。在MCAO/R模型中,EGBLI给药组、DECB-6P给药组和联合给药与MCAO/R模型组相比,组分别降低了缺血区MDA含量15.50%、20.18%、28.44%,并分别提高SOD酶活性44.66%、63.13%、73.80%,其中联合给药组的效果最为显著。（4）采用小鼠疲劳转棒仪和跑步机实验进行检测,实验结果表明,与MCAO/R模型组相比,EGBLI给药组、DECB-6P给药组和联合给药组,在疲劳转棒仪实验第1天时,滞留时间分别增加了0.46 min、0.75 min、1.08 min,第7天时,滞留时间分别增加了1.27 min、1.47 min、2 min;在跑步机实验第1天时,电击10次滞留时间分别增加了0.35 min、0.4 min、0.57 min,第7天时,增加了0.67 min、0.94 min、1.54 min。其中,联合给药组滞留时间增加最为明显。3.DECB-6P在小鼠大脑中药代动力学的研究首先利用高效液相色谱法,建立了检测DECB-6P的方法,并对其专属性、线性范围、精密度、准确度、稳定性、提取回收率和基质效应进行测定,其结果均符合生物样品分析,且具有灵敏度高,特异性强和稳定性强等优点,可以作为DECB-6P在小鼠大脑药代动力学的检测方法。另外,针对DECB-6P在小鼠脑组织药代动力学进行了研究,实验结果表明:计算DECB-6P脑药代动力学参数在45±1.2 min时,DECB-6P最高浓度为13.04±0.12μg/m L,半衰期为113.90±2.4min,说明DECB-6P可以快速通过血脑屏障,作用于小鼠大脑。综上所述,DECB-6P具有清除自由基、保护神经细胞、促进血管生成作用,DECB-6P与EGBLI联合给药可达到协同作用,提高药效的结果。但是据报导,在临床上注射用EGBLI不能与DECB同时使用,而DECB-6P成分单一,作用靶点明确,可与EGBLI一同使用。因此DECB-6P有望成为治疗缺血性脑卒中后减少脑梗塞面积、改善神经行为学能力,以及抗氧化应激作用的新型药物。