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背景:心源性猝死是一类重要的公共卫生问题,约占所有心血管死亡的50%,一般出现于患有潜在结构性心脏病人,其中最常见的就是缺血性心脏病。缺血性心脏病的主要病理特征是循环缺陷导致的心脏重构后供血或供氧减少,持续的心肌缺血缺氧会损害线粒体功能,线粒体是活性氧的主要来源,活性氧生成增多会导致氧化应激发生从而导致大量心肌细胞凋亡或死亡,造成不可逆转的损伤后果。生理状态下,活性氧在细胞信号传导和生物合成中起着重要作用,然而当机体处于病理状态时,抗氧化防御系统和活性氧产生之间的平衡被破坏,导致活性氧大量积累,进一步导致氧化应激的发生。氧化应激是导致组织损伤的关键因素,参与人体衰老及多种疾病过程,越来越多研究证明氧化应激参与多种心血管疾病的发生与发展。mi RNA是一类重要的内源性核苷酸,作为基因表达的转录后调节因子,参与调节多种生物学过程,是生物发育和细胞稳态的关键调节剂。mi RNA也参与由氧化应激引起的心脏损伤,并在其中扮演着重要的角色。有报道称,mi R-144-3p是一种与心脏损伤相关的氧化应激反应性mi RNA,其失调会促使心肌细胞产生氧化应激,进而引起与心脏损伤相关的疾病,然而其在缺血性心脏病中的作用机制尚不十分清楚。小窝蛋白（caveolin）是寡聚胆固醇结合蛋白,参与包括囊泡运输、脂质调节、信号转导和肿瘤抑制等在内的重要的细胞过程。小窝蛋白在哺乳动物中有CAV-1、CAV-2、CAV-3三种同工型,其中CVA-3主要分布在心肌细胞内,与心脏的发育、功能和疾病的发生有着密不可分的关系。目的:1、探究H2O2诱导心肌细胞氧化应激和凋亡时mi R-144-3p和CVA-3的表达水平。2、探究mi R-144-3p对H2O2诱导心肌细胞氧化应激和凋亡的影响。3、探究mi R-144-3p与CAV-3之间的调控关系及mi R-144-3p通过调控CAV-3影响H2O2诱导心肌细胞氧化应激和凋亡的可能机制及其法医病理司法意义。方法:1、用H2O2构建H9C2心肌细胞氧化应激和凋亡模型,并利用CCK-8确定合适的处理浓度及时间。2、用Western Blot和q RT-PCR检测CVA-3和mi R-144-3p在氧化应激中的表达情况。3、用瞬时转染法,将mi R-144-3p inhibitor和mi R-144-3p inhibitor NC转染心肌细胞,抑制心肌细胞内mi R-144-3p的水平,再利用Western Blot、TUNEL、ROS检测试剂盒、生化指标检测试剂盒分别检测Control、H2O2、mi R-144-3p inhibitor NC+H2O2、mi R-144-3p inhibitor+H2O2组凋亡和氧化应激相关指标。4、用瞬时转染法,将mi R-144-3p inhibitor和mi R-144-3p inhibitor NC转染心肌细胞,抑制心肌细胞内mi R-144-3p的水平,用Western Blot和q RT-PCR分别检测低表达mi R-144-3p后细胞内CVA-3的蛋白和m RNA水平。5、用瞬时转染法,将mi R-144-3p inhibitor、mi R-144-3p inhibitor NC和si-CAV3共转染心肌细胞,再利用Western Blot、TUNEL、ROS检测试剂盒、生化指标检测试剂盒分别检测mi R-144-3p inhibitor NC+H2O2、mi R-144-3p inhibitor+H2O2、mi R-144-3p inhibitor NC+si-CAV3+H2O2、mi R-144-3p inhibitor+si-CAV3+H2O2组凋亡和氧化应激相关指标。结果:1、CCK-8检测显示400μmol/L H2O2处理24h时心肌细胞生存率约为50%,后续选用400μmol/L H2O2处理24h作为本实验构建体外心肌细胞损伤模型的条件。2、400μmol/L H2O2处理心肌细胞24h后与Control组相比,Western Blot检测凋亡,相关蛋白显示Bax、Caspase-9、c-Caspase-3表达增多,Bcl-2表达减少,TUNEL测定显示细胞凋亡增加;Western Blot检测氧化应激相关蛋白显示Nox-2表达增加,Nrf-2表达减少,ROS检测结果显示心肌细胞内ROS水平升高,生化检测显示LDH、MDA水平升高,SOD水平降低。以上结果表明H9C2心肌细胞可以在H2O2的诱导下发生氧化应激和凋亡。3、心肌细胞发生氧化应激和凋亡的过程中mi R-144-3p水平升高,CAV-3 m RNA水平和蛋白水平均表达降低,且与mi R-144-3p的表达呈负相关,提示mi R-144-3p和CAV-3可能参与H2O2诱导的心肌细胞损伤。4、瞬时转染mi R-144-3p inhibitor抑制mi R-144-3p的表达,检测相关指标显示与H2O2组相比,mi R-144-3p inhibitor+H2O2组凋亡相关蛋白Caspase-9、c-Caspase-3、Bax表达减少,Bcl-2表达增加,细胞凋亡减少;氧化应激相关蛋白Nox-2表达减少,Nrf-2表达增加,细胞内ROS水平降低,LDH、MDA水平降低,SOD水平升高,表明抑制mi R-144-3p的表达可以逆转H2O2诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡。5、转染mi R-144-3p inhibitor,q RT-PCR检测结果显示CAV-3 m RNA水平显著升高,Western Blot检测发现CAV-3蛋白水平也显著升高。提示mi R-144-3p可能负调控CAV-3的表达。6、共转染si-CAV3和mi R-144-3p inhibitor,检测相关指标显示与mi R-144-3p inhibitor+H2O2组相比,mi R-144-3p inhibitor+si-CAV3+H2O2组凋亡相关蛋白Caspase-9、c-Caspase-3、Bax表达增多,Bcl-2表达减少,细胞凋亡增加;氧化应激相关蛋白Nox-2表达增多,Nrf-2表达减少,细胞内ROS水平升高,LDH、MDA水平升高,SOD水平降低,表明敲低CAV-3的表达可以逆转抑制mi R-144-3p对H2O2诱导心肌细胞氧化应激和凋亡的影响。结论:1、H2O2诱导的H9C2心肌细胞氧化应激和凋亡过程中mi R-144-3p水平升高,CAV-3水平降低。2、抑制mi R-144-3p的表达可减轻H2O2诱导的H9C2心肌细胞氧化应激和细胞凋亡。3、mi R-144-3p负调控CAV-3的表达。4、抑制mi R-144-3p通过促进CAV-3表达减轻H2O2诱导的H9C2心肌细胞氧化应激和细胞凋亡。mi R-144-3p可能是心脏缺血性疾病治疗和法医病理司法鉴定的靶点。