【摘 要】
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激光解吸电离质谱成像(LDI-MSI)能够直接从组织表面获得大量已知或未知化合物的组成、含量及空间分布信息。本论文使用傅里叶变换回旋共振质谱仪(FT-ICR-MS),研究了氧化铁纳米基质用于小分子LDI-MS分析,并用模拟组织切片评价质谱成像定量的准确性。(1)采用混合FeCl2·4H2O和3-氨丙基三乙氧基硅烷的方法合成氧化铁纳米粒子基质,研究了使用氧化铁纳米基质分析寡糖类、植物激素类、黄酮类、
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激光解吸电离质谱成像(LDI-MSI)能够直接从组织表面获得大量已知或未知化合物的组成、含量及空间分布信息。本论文使用傅里叶变换回旋共振质谱仪(FT-ICR-MS),研究了氧化铁纳米基质用于小分子LDI-MS分析,并用模拟组织切片评价质谱成像定量的准确性。(1)采用混合FeCl2·4H2O和3-氨丙基三乙氧基硅烷的方法合成氧化铁纳米粒子基质,研究了使用氧化铁纳米基质分析寡糖类、植物激素类、黄酮类、甘油三酯类、磷脂和氨基酸等小分子化合物的效果,显示氧化铁纳米基质具有稳定性好和背景噪音低的特点。通过考察实验条件的影响,在正离子模式下,选择激光能量为70%,平均光谱累积30次。采用先添加基质再加分析物的点样方式按照1:1等体积混合。结果显示,在选定条件下,谷氨酸、葡萄糖、蔗糖、脱落酸和三油酸甘油酯的点内重复性小于2.8%,点间重复性小于5.2%。蔗糖、蜜三糖、染料木素、脱落酸、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱、三油酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯和L-谷氨酸的检测限分别为2.3μg/m L、1.9μg/m L、2.3μg/m L、1.4μg/m L、6.7μg/m L、13μg/m L、13μg/m L和19μg/m L,在0.05-1.0 mg/m L浓度范围内测定上述八种样品的线性相关系数R~2>0.993,显示出了较好的定量分析潜力。用LDI-MSI分析大豆中的小分子成分,并对质谱峰进行了识别,结果显示寡糖成分主要集中在子叶外部和胚根处,甘油三酯成分在子叶部分分布较多。根据得到的实验结果,分析讨论了未检测出植物激素、黄酮类等小分子成分的原因。并对纳米基质制备过程中的影响因素进行了讨论,改进了文献中的制备方法。(2)研究制备了大豆匀浆模拟组织切片。考察了切片厚度、基质沉积方式、激光能量等实验参数对质谱分析的影响。在选定条件下,通过外加甲基红试剂的方式进行分析,考察了大豆模拟组织切片的均匀性和重复性。结果表明,大豆匀浆中非组织块染色部分达83.4%,大豆匀浆模拟组织切片中质谱峰强度的片内重复性RSD<11.6%,片间重复性RSD<12.8%。在2.5-25mg/g范围内测定匀浆中外加葡萄糖质谱峰强度与浓度的线性相关系数R~2>0.996。通过LDI-MS测得模拟组织切片中外加葡萄糖含量为5.4 mg/g,实际加入模拟组织模型中的葡萄糖浓度为6.2 mg/g,误差值与大豆匀浆中组织块的占比16.6%基本相符。使用将单糖生成的标准曲线近似测定二糖、三糖、四糖在大豆中的含量在3.9~10 mg/g。
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