羟基自由基杀灭刺激隐核虫及其对斜带石斑鱼肠道结构的影响

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海水鱼刺激隐核虫病是威胁海水鱼类养殖业最严重的病害之一,具有极高发病率和致死率、传播速度极快和无特异性宿主的特点,迄今尚无有效的防控措施。传统防控刺激隐核虫病的方法,如甲醛法、硫酸铜法等存在药物残留、对鱼体健康不利、污染近岸海域水质等问题,亟需一种高效、安全、绿色无污染的新方法来解决刺激隐核虫病这一国际难点。本文利用大气压强电离放电生成高浓度的氧活性粒子气体,在气液混溶器中与海水混合,经水射流空化作用,生成高浓度的·OH溶液,注入至体积为500 L的养殖池内,实现快速杀灭养殖水体中的刺激隐核虫幼虫,保证养殖鱼体健康,具体工作内容如下:(1)进行了·OH对刺激隐核虫幼虫的体外杀灭实验,构建·OH杀灭幼虫的实验装置,制备·OH溶液注入至含幼虫溶液的烧杯中,利用明场显微镜镜检和FDA/PI荧光双染判断幼虫的死活,确定·OH对1000 cells·mL-1幼虫的杀灭阈值为 0.50mg/L、杀灭时间为 30 s、CT 阈值为 0.25 mg·min/L。(2)构建·OH防控斜带石斑鱼刺激隐核虫病的实验系统,在500 L养殖池内开展中试实验,并进行与常规化学药剂ClO2和甲醛的对比实验。在·OH防控实验中,将·OH溶液注入至养殖池内,待养殖池内TRO浓度达到0.5 mg/L后维持10 min,每日处理三次,连续处理4 d后,流水养殖5 d。在·OH处理的维持阶段中,幼虫杀灭率为100%;石斑鱼存活率由感染处理组的56.7%提升至100%。说明·OH能高效杀灭幼虫,并阻断刺激隐核虫的传播,提高石斑鱼的存活率,在实际应用中可以做到高效防控刺激隐核虫病1.0 mg/L的ClO2对比实验中,ClO2处理幼虫杀灭率为100%;但石斑鱼存活率仅为36.1%。说明ClO2虽能阻断刺激隐核虫的传播,但对石斑鱼健康造成急性毒性效应,导致石斑鱼大量死亡。在甲醛对比防控实验中,甲醛处理的维持阶段中,幼虫杀灭率为100%;石斑鱼存活率为100%。说明甲醛能阻断刺激隐核虫的传播,但由于使用剂量较高,导致药物残留,污染近岸海域。(3)对防控实验中石斑鱼肠道结构进行研究,在·OH防控实验中,没有对石斑鱼肠道组织结构造成损伤,肠道黏膜绒毛保持完整健康,无明显肠道病理特征,且鱼体恢复正常摄食,与对照组无异,有利于斜带石斑鱼安全健康养殖。在ClO2对比实验中,石斑鱼肠道组织结构造成不可逆损伤,不利于斜带石斑鱼的健康安全养殖;在甲醛对比实验中,石斑鱼肠道组织发生轻微病变,不利于石斑鱼长期健康养殖。综上,本文利用大气压强电离放电制备高浓度的·OH,实现对刺激隐核虫幼虫的快速高效杀灭,并且有利于石斑鱼的健康养殖,为防控刺激隐核虫病提供了新方法。
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