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本研究在猪的SDHD、DCN和PEGl基因的外显子上寻找多态(SNP或微卫星标记),以SNP或微卫星为遗传标记研究SDHD、DCN和PEG1的印记表达特征,并分析这些基因在哺乳动物中的印记情况是否具有保守性,为研究印记基因与家畜生长发育和生产的关系打下基础,并也将丰富表观遗传理论的内容。
1、参考猪的SDHD(succinate-ubiquinone oxidoreductasesubunit D)的外显子序列,设计并合成引物,进行PCR扩增,以SSCP(Single Strand Conformational Polymorphism)的方法在猪SDHD的外显子4第131个碱基处(5’→3’)发现一个SNP(G→T),并发现此SNP为MboⅠ酶切位点。
2、选取猪的SDHD的外显子4的SNP为杂合子的仔猪3头(1-2周龄),以其主要的组织器官mRNA的RT-PCR产物经SSCP-PAGE电泳,发现SDHD的外显子4在这三头猪的心脏、肝脏、脑、肺脏、肾脏、胃、胰腺、胸腺、舌、肌肉、膀胱、脾脏、胎盘等组织器官中同时表达父母双方来源的等位基因。
3、参考猪的DCN(Decorin)的外显子序列,设计并合成引物,进行PCR扩增,以SSCP的方法在猪的DCN外显子2上发现一个SNP(T→A),此多态位点位于DCN编码区第30个碱基处。
4、选取猪的DCN的外显子2的SNP为杂合子的仔猪3头(1-2周龄),以其主要组织器官mRNA的RT-PCR产物经SSCP-PAGE电泳,发现DCN的外显子2在这三头猪的心脏、肝脏、脑、肺脏、肾脏、胃、胰腺、胸腺、舌、肌肉、膀胱、脾脏、胎盘等组织器官中同时表达父母双方来源的等位基因。
5、参考猪的PEG1(Paternally expressed gene 1)部分外显子序列,设计并合成引物,进行PCR扩增,以SSCP的方法在猪的外显子12上发现一个SNP(G→A)。
6、选取猪的PEG1的外显子12的SNP为杂合子的仔猪3头(1-2周龄),以其主要的组织器官mRNA的RT-PCR产物经SSCP-PAGE电泳,发现PEG1的外显子12在这三头猪的心脏、肝脏、脑、肺脏、肾脏、胃、胰腺、胸腺、舌、肌肉、膀胱、脾脏、胎盘等组织器官中仅表达父方来源的等位基因,证明猪PEG1呈父方表达、母方印记的遗传特性。