【摘 要】
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维生素A是人体所必需的脂溶性维生素,在人体正常生理活动起着重要的作用。鱼类肝脏中维生素A含量丰富且经济易得,是获取天然维生素A的优良原料。本实验将对不同维生素A提取及检测方法进行比较,筛选出最佳提取检测方法比较龙趸石斑鱼与其他八种经济鱼类肝脏中维生素A类型及其总含量,研究龙趸石斑鱼肝脏维生素A的存在形态,通过细胞实验,探究龙趸石斑鱼肝脏中存在的维生素A酯,对苯扎氯氨诱导的角膜上皮细胞的影响。提高龙
【基金项目】
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“蓝色粮仓科技创新”国家重点研发计划（2018YFD0901105）；
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维生素A是人体所必需的脂溶性维生素,在人体正常生理活动起着重要的作用。鱼类肝脏中维生素A含量丰富且经济易得,是获取天然维生素A的优良原料。本实验将对不同维生素A提取及检测方法进行比较,筛选出最佳提取检测方法比较龙趸石斑鱼与其他八种经济鱼类肝脏中维生素A类型及其总含量,研究龙趸石斑鱼肝脏维生素A的存在形态,通过细胞实验,探究龙趸石斑鱼肝脏中存在的维生素A酯,对苯扎氯氨诱导的角膜上皮细胞的影响。提高龙趸石斑鱼资源的利用率,扩大生产鱼肝油天然原料来源,并为维生素A的提取利用提供基础数据。主要研究内容和结果如下:（1）通过不同样品提取方法（水浴皂化法,室温皂化法,直接提取法）、检测方法（正相色谱法,反相色谱法）,建立一种准确测定鱼类肝脏中维生素A（维生素A1、维生素A2）含量的方法,并将其应用于九种经济鱼类肝脏中维生素A的测定。结果表明:维生素A1、维生素A2标准品用反相色谱法检测分离结果良好,且在各自线性范围内线性关系良好,R~2均大于0.99;水浴皂化法维生素A含量显著高于室温皂化法及直接提取法（p＜0.05）,且其对维生素A1平均回收率为104.52%,维生素A2的平均回收率为90.94%;在这九种鱼中,除了淡水乌鳢和淡水大口黑鲈外,其他淡水、海水鱼类肝脏维生素A总含量均达200μg/100g以上,其中海水龙趸石斑鱼肝脏维生素A总含量最高,达到14 413.78μg/100g。水浴皂化法结合反相色谱法精密度良好,适用于鱼类肝脏中维生素A的分析测定。（2）采用色谱测定石斑鱼肝脏中游离维生素A与结合维生素A的比例,利用质谱,脂质组学分析测定维生素A酯,测定龙趸石斑鱼肝脏中维生素A的存在形态。结果表明:龙趸石斑鱼肝中99.57%的维生素A以结合形式存在,游离态仅占0.43%。三种甘油酯中中性脂组分占比86.84%,占比最高,糖脂次之,磷脂占比最低为0.73%。维生素A与磷脂结合率最高,中性脂次之,糖脂最低;中性脂主要组分为甘油三酯（TAG）,糖脂主要组分为单半乳糖甘油二酯（MGDG）,磷脂主要组分为磷脂酰肌醇（PI）和溶血磷脂酰胆碱（LPC）;中性脂中棕榈酸比例较高,糖脂中DHA比例较高,磷脂中棕榈酸比例较高。中性脂组分中分离出的F3组分主要含维生素A棕榈酸酯。（3）采用制备液相分离纯化龙趸石斑鱼肝脏中性脂中的维生素A酯,以商品维生素A棕榈酸酯作为对照组,基于苯扎氯铵诱导人角膜上皮细胞建立的干眼症模型细胞,探究天然及合成维生素A酯对细胞活性及炎症因子表达的影响。结果表明:低、中浓度的F3组细胞活力高于高浓度F3及低、中、高浓度的维生素A棕榈酸酯组。在白介素（IL-6）相对表达量中低、中剂量的F3及低剂量的维生素A棕榈酸酯组显著高于中、高剂量的维生素A棕榈酸酯组,在肿瘤坏死因子-α（TNF-α）相对表达量中,低、中、高剂量的F3组显著低于低剂量维生素A棕榈酸酯组（p＜0.05）。F3及维生素A棕榈酸酯均能下调细胞中IL-6及TNF-α的基因表达（p＜0.05）,缓解干眼病导致的炎症。
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