【摘 要】
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第一部分:年轻健康髓核细胞新表型在大鼠椎间盘中的表达目的:进一步证实Risbud教授2015年美国骨科研究学会年会（ORS）推荐的健康髓核表型在大鼠髓核细胞中的表达。方法:在常氧和缺氧条件下,通过免疫荧光法、qPCR和western blot分析髓核细胞新表型aggrecan、brachyury、carbonic anhydrase 3、carbonic anhydrase 12、CD24、Col
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81572170, 81572190）； 江苏省普通高校研究生创新计划项目（KYCX170182）；
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第一部分:年轻健康髓核细胞新表型在大鼠椎间盘中的表达目的:进一步证实Risbud教授2015年美国骨科研究学会年会（ORS）推荐的健康髓核表型在大鼠髓核细胞中的表达。方法:在常氧和缺氧条件下,通过免疫荧光法、qPCR和western blot分析髓核细胞新表型aggrecan、brachyury、carbonic anhydrase 3、carbonic anhydrase 12、CD24、CollagenⅡ、Glut-1、Hif-1α、Hif-2α、cytokeratin 8、cytokeratin 18、cytokeratin 19、shh的表达。结果:qPCR、western blot和免疫荧光分析结果表明,ORS推荐的年轻健康髓核细胞新表型在常氧和缺氧培养条件下均表达。缺氧培养条件下,大鼠髓核细胞aggrecan、brachyury、carbonic anhydrase 3、carbonic anhydrase12、CD24、CollagenⅡ、Glut-1、Hif-1α、Hif-2α、cytokeratin 8、cytokeratin 18、cytokeratin 19、shh的表达均显著高于常氧培养条件。结论:研究提示髓核细胞在缺氧微环境中年轻健康髓核细胞新表型表达更高。因此,我们建议年轻健康髓核细胞新表型可作为髓核细胞鉴定标准,可为今后进一步的细胞实验研究提供理论参考。第二部分:条件培养液培养下骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化的研究目的:探讨条件培养液培养下骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化的研究。方法:采用qPCR和western blot检测50%和100%髓核细胞条件培养液处理的骨髓间充质干细胞在常氧和缺氧条件下的年轻健康髓核细胞新表型表达。结果:qPCR和western blot结果显示,缺氧条件下培养的骨髓间充质干细胞与常氧条件下培养的骨髓间充质干细胞相比,经50%或100%髓核细胞条件培养液处理的骨髓间充质干细胞的年轻健康髓核细胞新表型表达显著上调。与对照组相比,100%髓核细胞条件培养液中的年轻健康髓核细胞新表型上调率最高（aggrecan,p＜0.01;brachyury,p＜0.05;collagen II,p＜0.001;KRT8,p＜0.01;KRT19,p＜0.001;Shh,p＜0.01）。与对照组相比,50%髓核细胞条件培养液处理的骨髓间充质干细胞的基因表达水平也出现上调（collagen II,p＜0.05;KRT8,p＜0.05;KRT19,p＜0.01）。结论:髓核细胞条件培养液可促进骨髓间充质干细胞向髓核样细胞表型分化,研究结果可为椎间盘再生和组织工程修复提供一定的实验依据。
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