【摘 要】
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本课题组前期筛选得到一株高产抗菌肽的侧孢短芽孢杆菌,研究表明其具有高效广谱抑菌能力且稳定性好,有望被开发为食品防腐剂,但其结构尚未明确。明确其结构是合理使用抗菌肽的关键,因此本论文利用高效液相色谱法从侧孢短芽孢杆菌S62-9发酵液中分离纯化brevilaterin,利用质谱法和核磁共振技术（NMR）鉴定brevilaterin结构,最后考察其作为食品防腐剂在牛乳中的应用效果,为其在牛乳防腐中的应用
【基金项目】
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十三五国家重点研发项目2016YFD0400805；
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本课题组前期筛选得到一株高产抗菌肽的侧孢短芽孢杆菌,研究表明其具有高效广谱抑菌能力且稳定性好,有望被开发为食品防腐剂,但其结构尚未明确。明确其结构是合理使用抗菌肽的关键,因此本论文利用高效液相色谱法从侧孢短芽孢杆菌S62-9发酵液中分离纯化brevilaterin,利用质谱法和核磁共振技术（NMR）鉴定brevilaterin结构,最后考察其作为食品防腐剂在牛乳中的应用效果,为其在牛乳防腐中的应用提供理论指导。通过低压快速纯化色谱系统将brevilaterin和杂质初步分离,得到brevilaterin多组分混合物,利用半制备型高效液相色谱仪对混合物进行高纯度精制,得到6个纯度98%以上的肽组分纯品（brevilaterin X、A、B、C、D、E）。由MALDI-TOF MS得知brevilaterin X、A、B、C、D、E的分子量为1568.9753,1555.0334,1601.0044,1569.0189,1583.0344,1583.0946 Da,MALDI-TOF/TOF MS结合NMR(~1H-~1H TOCSY、~1H-~1H NOESY、13C-~1H HSQC谱图)确定其结构均由包括3个修饰氨基酸在内的13个氨基酸和一个N末端C6脂肪酸Hmp（2-羟基-3-甲基戊酸）构成,3个修饰氨基酸分别为Aba（2-氨基-2-烯丁酸）、鸟氨酸以及C末端valinol（2-氨基-3-甲基-1-丁醇）。其一级结构序列为Hmp-Aba-V-Orn-I-V-V-K-V-L-K-Y-L-valinol（brevilaterin X）、Hmp-Aba-V-Orn-V-V-V-K-V-L-K-Y-L-valinol（brevilaterin A）、Hmp-Aba-M-Orn-I-V-V-K-V-L-K-Y-L-valinol（br-evilaterin B）、Hmp-Aba-V-Orn-I-V-V-K-V-L-K-Y-L-valinol（brevilaterin C）、Hmp-Aba-V-Orn-I-V-I-K-V-L-K-Y-L-valinol（brevilaterin D）、Hmp-Aba-L-Orn-I-V-V-K-V-L-K-Y-L-valinol（brevilaterin E）。通过添加brevilaterin考察其在生鲜乳中的防腐效果,试验表明空白对照组在第6 d细菌数为7Lg CFU/m L,霉菌及酵母数6.5Lg CFU/m L,酸度45?T,;而1 mg/m L的brevilaterin在第6 d降低需氧嗜温细菌数2Lg CFU/m L,大肠菌群数2Lg CFU/m L,霉菌及酵母菌数1.5Lg CFU/m L,乳酸菌数1.5Lg CFU/m L,降低酸度29?T,可将生鲜乳保质期延长至第6 d。另外通过向全脂灭菌乳中分别接种枯草芽孢杆菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌1×10~5CFU/m L考察brevilaterin对它们的抑制效果,试验结果表明0.4 mg/m L的brevilaterin在24 h内对枯草芽孢杆菌达到了杀菌效果,0.5 mg/m L的brevilaterin对单核细胞增生李斯特菌在第3 d达到彻底杀菌的效果,1 mg/m L的brevilaterin在8 h对金黄色葡萄球菌达到了杀菌效果,均可维持至第14 d,14 d内牛乳组织状态良好。
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宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。近些年的研究发现,嗜神经浸润与宫颈癌的预后也存在相关性。在嗜神经浸润的相关文献中发现,在国内外研究中,嗜神经浸润的诊断率为7%～35%,中国宫颈癌临床诊疗大数据库中的嗜神经浸润阳性的原始检出率明显偏低,为探究其原因,我们计划从大数据中筛选原始病理报告中报告嗜神经浸润阳性的病例,并对其术后病理玻片进行复片后分析。探讨宫颈癌嗜神经浸润的发生率、相关因素及对肿瘤学预后的