溶藻弧菌作为水产养殖主要的革兰氏阴性致病菌,给我国的经济发展造成了巨大的损失。本论文拟从生物学特性、转录水平、细胞毒性和减毒活疫苗四个方面,研究溶藻弧菌T3SS C-环组分Vsc Q的功能。溶藻弧菌C-环组分Vsc Q作为三型分泌系统的重要组成部分,对溶藻弧菌的致病性产生重要影响。通过同源重组和Overlap PCR技术,采用plp12(CM+)自杀质粒和大肠杆菌β2163结合体系,在野生株溶藻弧菌HY9901基因组上成功框内缺失vscQ基因,获得无抗性的框内缺失株HY9901ΔvscQ。通过对溶藻弧菌HY9901ΔvscQ进行生物学表型研究发现:溶藻弧菌vscQ基因的缺失对生长曲线、生物膜形成能力、胞外蛋白酶活性(ECPsase)的影响不显著,但是溶藻弧菌的泳动能力显著下调(p<0.01)。斑马鱼的半致死实验表明:C-环组分Vsc Q的缺失使野生株HY9901的毒力下降约4.6倍。应用q RT-PCR技术研究溶藻弧菌vscQ基因的缺失对野生株转录水平的影响。结果发现:与野生株相比,溶藻弧菌Vsc Q的缺失对T3SS效应蛋白Vop N的转录水平影响不显著,对效应蛋白Va1686及Vop S、装置蛋白Vsc L、Vsc K、Vop B、Vop D、Vcr V、分子伴侣Vsc O与ATPase Vsc N的转录水平均有显著影响,同时显著下调鞭毛蛋白Fla A与鞭毛形成蛋白Fli G转录水平(p<0.01)。HY9901ΔvscQ感染鲤鱼上皮细胞FHM发现:缺失株感染后显著降低细胞Caspase-3的活性(p<0.01),表明Vsc Q蛋白参与溶藻弧菌致细胞凋亡过程。同时,伴随着细胞大量死亡,LDH和NO的释放量显著降低(p<0.01)。这表明蛋白Vsc Q参与溶藻弧菌侵染细胞过程,它的缺失降低了溶藻弧菌对鱼类细胞的毒性。应用HY9901ΔvscQ作为减毒活疫苗免疫斑马鱼四周后,用强毒株HY9901进行攻毒实验,对照组的死亡率为57.7%,而免疫组的死亡率仅为16.3%,相对免疫保护率RPS为71%。通过对ΔvscQ感染后的肝脏和脾脏细菌定量实验发现,ΔvscQ在免疫第二天时细菌量达到最大,随后逐渐减少,在第八天被机体清除。免疫四周后,与PBS对照组相比,ΔvscQ免疫组能显著增强脾脏和肝脏中免疫相关基因TNF-α、TLR5、IL-6R、Ig M和c/ebpβ的表达水平(p<0.01)。这些结果表明缺失株HY9901ΔvscQ可以作为一种有效的减毒活疫苗拮抗溶藻弧菌感染,同时为减毒活疫苗候补菌株HY9901ΔvscQ提供了理论依据。