【摘 要】
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菌株筛选是微生态制剂研发的重点。具有宿主特异性的乳酸菌被认为是生产微生态制剂的优良候选菌株。因此,本试验旨在分离筛选对鸭益生作用的同源乳酸菌,从而为肉鸭的健康养殖提供科学依据。实验一:通过抑菌实验、耐胆盐实验、模拟胃肠实验、耐药性实验、生长特性等多方面实验,从健康鸭肠道中分离筛选乳酸菌菌株。对分离得到的菌株进行形态学观察、生理生化特性研究及16s r RNA测序鉴定。然后进行室温常压等离子体诱变(
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菌株筛选是微生态制剂研发的重点。具有宿主特异性的乳酸菌被认为是生产微生态制剂的优良候选菌株。因此,本试验旨在分离筛选对鸭益生作用的同源乳酸菌,从而为肉鸭的健康养殖提供科学依据。实验一:通过抑菌实验、耐胆盐实验、模拟胃肠实验、耐药性实验、生长特性等多方面实验,从健康鸭肠道中分离筛选乳酸菌菌株。对分离得到的菌株进行形态学观察、生理生化特性研究及16s r RNA测序鉴定。然后进行室温常压等离子体诱变(ARTP)诱变及发酵工艺优化。结果表明:(1)从健康鸭的肠道分离筛选到一株对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌具有很强抑制作用的乳酸菌菌株。该菌株生长速度快、产酸能力强,能耐0.1%胆盐,模拟胃液肠液处理2 h该菌成活率均为100%,对氯霉素、青霉素、头孢曲松三种抗生素药物敏感。革兰氏染色阳性,呈球杆状,成对排列或链状排列。生理生化特性研究结果判断为乳酸杆菌,16s r RNA测序鉴定为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri strain)。(2)37℃下,该菌株生长速度快,1%接种量发酵,1-2 h为生长潜伏期,2 h后进入对数生长期,8-10 h进入平台期。(3)该菌株(D61)最佳ARTP诱变时间为45 s,此时致死率为93.4%。经诱变筛选后,277号菌株对大肠杆菌的抑菌率提高了10.64%,对沙门氏菌抑菌率提高了9.42%,对金黄色葡萄球菌抑菌率提高了9.20%。(4)通过单因素试验以及正交试验,罗伊氏乳杆菌277号诱变菌株优化后的培养基及培养条件为:葡萄糖20 g/L,酵母粉20 g/L,大豆蛋白胨10 g/L,牛肉膏5 g/L,柠檬酸二铵2 g/L,乙酸钠5 g/L,硫酸锰0.05 g/L,吐温80 1 g/L。最适发酵条件p H为6.0-7.5,温度37℃,装液量为60%。实验二:选用21日龄健康的番鸭1680只,采用单因子试验设计,按照体重无显著性差异原则随机分成4个组,即A组(空白对照组,饲喂基础日粮)、B组(试验1组,在基础日粮中添加枯草芽孢杆菌5×105cfu/g)、C组(试验2组,在基础日粮中添加的罗伊氏乳杆菌277号106cfu/g)与D组(试验3组,在基础日粮中添加的枯草芽孢杆菌5×105cfu/g与罗伊氏乳杆菌277号106cfu/g)。研究实验一所分离得到的277号罗伊氏乳杆菌对番鸭生长性能、免疫器官指数、屠宰性能的影响。结果为:(1)在生长性能方面,在21-50日龄期间,与A组(对照组)相比,B、C、D各组日均增重分别显著(P<0.05)提高了3.25%、2.60%、3.14%;料重比方面,B、C、D各组比A组分别降低2.65%、1.75%、2.65%,差异均显著性(P<0.05)。B、C、D各组成活率显著高于A组(P<0.05),B、D两组成活率显著高于C组。(2)在免疫器官方面,50天龄时,B、D两组胸腺指数显著高于A组、C组(P<0.05),相对A组,分别提高了11.27%,13.09%;B、C、D组法氏囊指数比A组分别高了37.04%,38.27%,50.62%,均差异显著(P<0.05)。(3)在屠宰性能方面,腿肌率方面,B、C、D三组均显著高于A组(P<0.05),分别提高了14.34%,25.41%,34.97%,且C、D三组均显著高B组(P<0.05)。腹脂率方面,B、C、D各组比A组分别降低了10.64%、16.17%、11.91%,均差异显著(P<0.05)。结论:从健康鸭的肠道分离筛选到一株对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌具有较强抑菌作用的乳酸菌菌株。该菌株具有生长速度快、产酸能力强、耐胆盐、耐胃酸的特性,同时对氯霉素、青霉素、头孢曲松三种抗生素药物敏感。经生理生化特性与16s r RNA测序鉴定为罗伊氏乳杆菌。经ARTP诱变,筛选到一株抗菌能力更强的罗伊氏乳杆菌突变菌株277号菌株,并对其培养基及培养条件进行了优化。动物试验结果表明277号罗伊氏乳杆菌菌株可显著提高番鸭生长性能、免疫器官指数、屠宰性能,与芽孢杆菌复合使用效果更佳。
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