大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）是人和动物肠道的正常菌群,在自然界广泛存在。当机体应激或免疫力下降时,可导致人和动物发病,给人类健康、畜牧业发展以及野生动物保护带来一定的危害。大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）作为国家一级保护动物,是世界公认的易危野生动物。而大肠杆菌引起的肠道疾病是危害大熊猫健康的重要原因之一。大熊猫源大肠杆菌的研究主要集中在血清型和耐药表型研究方面,而其耐药基因以及致病性的研究鲜有报道。本研究对2020~2021年间,从成都大熊猫繁育研究基地100只圈养大熊猫粪便样品中分离鉴定出的100株大肠杆菌进行了血清型鉴定、耐药表型和基因型分析、毒力基因携带情况以及致病性研究,明确了该基地圈养大熊猫种群来源的大肠杆菌的基本生物学特征,为临床合理用药提供指导的同时,对大熊猫等野生动物的保护具有重要意义。主要研究结果如下:1、大熊猫源大肠杆菌O抗原血清型和致病型采用玻片凝集试验对100株大熊猫源大肠杆菌进行17种优势O抗原血清型鉴定。结果显示,100株大肠杆菌中有32株可定型,分属于12种不同的血清型,优势血清型为O20、O158、O15及O9,占定型株的59.3%（19/32）;结合已有文献关于大肠杆菌血清型与致病型的关系,优势血清型所属的致病类型为肠致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌;明确了该圈养大熊猫种群来源的部分大肠杆菌的血清型。2、大熊猫源大肠杆菌耐药表型和基因型采用K-B纸片法对100株大熊猫源大肠杆菌进行八大类33种抗菌药物的耐药表型检测,结果显示,大熊猫源大肠杆菌耐药谱较广,其中对恩诺沙星的耐药率最高（68%）,其次为氨苄西林（56%）、亚胺培南（55%）、阿莫西林（54%）、头孢氨苄（52%）;对美罗培南（100%）和头孢西丁（100%）的敏感性最高。此外,100株大肠杆菌中多重耐药菌株占48%,对20种及以上抗生素耐药的菌株占38%。大熊猫的年龄和性别对大肠杆菌的耐药性有一定的影响,幼年大熊猫来源的大肠杆菌对氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、阿米卡星和阿奇霉素的耐药率显著高于其他年龄组（P＜0.01）;雌性大熊猫来源的大肠杆菌对哌拉西林和新霉素的耐药率显著高于相比雄性大熊猫来源的大肠杆菌（P＜0.05）。采用超高通量荧光定量PCR（HT-q PCR）技术对100株大熊猫源大肠杆菌进行47种耐药基因检测。结果显示:菌株携带6~31种耐药基因,以多药耐药基因acr A-04（99%）和acr A-05（99%）检出率最高,其次为氨基糖苷类aac C（98%）,β-内酰胺类bla CTX-M-04（98%）、amp C-04（97%）、bla SHV-01（94%）和bla TEM（90%）。老年大熊猫来源的大肠杆菌携带bla OXY、aac（6’）I1和tet D-02耐药基因的比例显著高于其他年龄组（P＜0.01）,成年和幼年大熊猫来源的大肠杆菌对bla CTX-M-03、bla SHV-02和cat A1耐药基因携带率显著高于老年和亚成年组（P＜0.05）。雄性大熊猫来源的大肠杆菌对bla NDM携带率显著高于雌性;雌性大熊猫来源的大肠杆菌对amp C-04和bla SHV-02携带率显著高于雄性（P＜0.05）。3、大熊猫源大肠杆菌的毒力基因携带情况及代表性菌株对小鼠的致病性采用普通PCR技术对100株大熊猫源大肠杆菌进行大肠杆菌黏附素类、毒素类、铁摄取类和保护素类等17种毒力基因进行检测。结果显示:100株大熊猫源大肠杆菌携带了1~11种毒力基因,其中pap A检出率最高（99%）,其次为fim C（74%）、fyu A（48%）、omp T（45%）、ast A（37%）、sit A（35%）、iss（30%）;没有检测到hly A、elt和eat A基因。根据血清型、致病型和毒力基因携带情况,选出5株菌（GP8、GP67、GP58、GP54、GP22）,通过腹腔注射,研究其对昆明小鼠的致病性。结果显示:5株菌分别在1.36×10^9CFU（GP8）、8.7×10^8CFU（GP67）、5.7×10^9CFU（GP58）、2.99×10^10CFU（GP54）、2.27×10^10CFU（GP22）细菌量的情况下对小鼠有致死性（100%）,而在其他剂量下对小鼠无致死性;主要病变发生在小肠粘膜,提示肠道为该菌的最可能入侵部位,以上代表性菌株虽对小鼠有致病性,但毒力不强。本研究表明,大熊猫源大肠杆菌血清型较多,O20、O158、O15及O9为优势血清型;耐药谱广,多重耐药现象严重;携带45种耐药基因,以多药耐药基因acr A-04和acr A-05检出率最高,菌株耐药表型和耐药基因型有一定的相关性;携带的毒力基因以pap A为主（99%）,部分菌株具有一定的致病性,但致病性不强。