宠物临床因革兰阴性菌引发的呼吸道、胃肠道及泌尿系统感染等常有发生,多西环素因其抗菌谱广、价格便宜等优点被广泛用于治疗这些细菌性疾病。随着宠物临床上多西环素的使用量不断积累,细菌耐药性问题也随之产生。目前,通过某种化合物或抗生素佐剂来恢复多西环素对耐药菌的抗菌活性是很有希望的方向。近期有研究表明二甲双胍作为抗二型糖尿病药物具有增强多西环素对多重耐药菌（金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌和肠炎链球菌）的抗菌作用,这为宠物临床上治疗耐多西环素革兰阴性菌引起的感染性疾病提供了全新策略。本实验从宠物临床细菌性感染样本中分离出六类具有代表性的革兰阴性杆菌,分别是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞杆菌、鲍曼不动杆菌及奇异变形杆菌,每类细菌各分离3株。临床分离株中,首先对多西环素敏感的细菌进行体外诱导耐药,建立多西环素耐药模型并进行初步的耐药性特征分析。同时检测耐药菌的生物膜形成能力及外排泵表达能力,研究其产生耐药的机制。然后应用低于MIC倍数剂量的二甲双胍与多西环素联合用药对获得性耐药及天然耐药的革兰氏阴性杆菌进行联合处理,通过此方法来评估二甲双胍是否能增强多西环素对多种革兰阴性耐药菌的抗菌能力,并分析其原因。实验取得的结果如下:1.分离细菌中,除鲍曼不动杆菌分离株对多西环素全部敏感以外,其余细菌对多西环素均存在耐药状况。2.宠物临床对多西环素敏感的分离株进行体外诱导耐药后,所有耐药菌株外排泵表征试验显示,加入外排泵抑制（CCCP）后各菌株对多西环素的MIC下降2-128倍。大肠埃希菌,肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌经多西环素诱导后外排泵调控基因均明显上调;天然耐药的铜绿假单胞菌相比于标准菌株,外排泵调控基因同样明显上调;鲍曼不动杆菌和奇异变形杆菌的耐药菌株未检测到主要外排泵基因的表达。3.二甲双胍与多西环素联合用药处理大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌及阴沟肠杆菌耐药株后,成功降低了细菌对多西环素的MIC,同时外排泵调控基因均明显下调且细菌胞内多西环素含量明显升高（P＜0.05）。结论:成功建立宠物源革兰阴性杆菌多西环素耐药的体外模型。二甲双胍与多西环素联合用药可以通过抑制外排泵调控基因的表达增强多西环素在细菌胞内的积累量来逆转大肠埃希菌,肺炎克雷伯菌,铜绿假单胞菌及阴沟肠杆菌耐药菌株的耐药性。