【摘 要】
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鸡球虫病是由鸡球虫感染所导致的呈全球性分布的重要动物寄生虫病,其中柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）致病性最强,2020年全球因球虫病造成的经济损失高达100.4亿英镑（约898亿人民币）。现今,球虫病防治仍依赖药物及传统活卵囊疫苗,但存在常用抗球虫药物耐药性严重,传统的鸡球虫疫苗可能会有潜在爆发鸡球虫病的风险等问题,在使用中具有一定的局限性。新型抗球虫疫苗如亚单位疫苗等研制具有广阔
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鸡球虫病是由鸡球虫感染所导致的呈全球性分布的重要动物寄生虫病,其中柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）致病性最强,2020年全球因球虫病造成的经济损失高达100.4亿英镑（约898亿人民币）。现今,球虫病防治仍依赖药物及传统活卵囊疫苗,但存在常用抗球虫药物耐药性严重,传统的鸡球虫疫苗可能会有潜在爆发鸡球虫病的风险等问题,在使用中具有一定的局限性。新型抗球虫疫苗如亚单位疫苗等研制具有广阔的应用前景。Eimeria tenella在入侵宿主细胞时其棒状体分泌一系列蛋白质,这对于虫体入侵细胞及存活过程中发挥重要作用,弓形虫棒状体蛋白是最具潜力的疫苗候选抗原分子之一,那么Eimeria tenella棒状体蛋白是否可作为潜在的候选疫苗抗原?鉴于此,本研究以Et ROP21为研究对象,探讨Et ROP21的分泌特征及其作为疫苗的候选抗原的价值。本研究中,我们从北京株柔嫩艾美耳球虫的子孢子c DNA中扩增并克隆了Et ROP21基因,进一步构建原核表达载体PET32a-Et ROP21,使用大肠杆菌表达了Et ROP21蛋白。为了评价ROP21蛋白的免疫保护效果,本研究设三组进行鸡攻毒试验,分别为免疫组（免疫攻虫组）、阳性组（不免疫攻虫组）和阴性组（不免疫不攻虫组）。三次免疫1周后对免疫组和阳性组所有雏鸡进行口服2000万E.tenella孢子化卵囊攻虫实验。攻毒期间监测其增重、死亡情况、卵囊排出情况等数据,攻毒后进行剖检,观察盲肠病变情况。最后综合数据分析,评价ROP21重组蛋白的免疫保护效果。结果显示,PCR扩增的ROP21序列与预测序列的同源性为100%,该序列编码了327个氨基酸,在二级结构中存在α螺旋、β折叠及无规则卷曲等多种结构,并且预测到具有8个潜在抗原表位。ROP21重组蛋白对鸡的免疫保护结果经统计学分析显示,攻虫后三组鸡存活率100%。免疫组体重增长略高于不免疫攻虫组（P＜0.05）;不免疫不攻虫组增重高于不免疫攻虫组（P＜0.05）。免疫组卵囊排出量低于阳性组,但差异不显著（P＞0.05）;盲肠病变记分免疫组盲肠病变明显减少（P＜0.05）。综合上述结果,对免疫组ACI（抗球虫指数）进行了分析为163.23（ACI＞160）,阳性组为133.78,阴性组为200。根据免疫保护效果的各项指标来看ROP21重组蛋白免疫后可以提供部分保护力。对鸡血清的Western-blot结果表明ROP21重组蛋白免疫可使鸡产生特异性抗体,经ELISA方法测得,稀释倍数在1:100-12800的范围内都具有免疫原性。
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