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雌性动物在分娩结束后一定时间内,子宫逐渐恢复至孕前状态的生理过程称为子宫复旧,经历了包括子宫体积缩小和重量减轻,子宫肌收缩,子宫内膜增生以及血管修复等一系列变化后才能确保下一次妊娠的正常进行。子宫复旧不良会延长奶牛的产犊间隔,降低生产效率。多种原因都能影响奶牛产后子宫机能的恢复,子宫内膜炎和子宫收缩无力是导致子宫复旧不良的主要因素。目前国内外主要尝试使用雌激素、前列腺素、微量元素硒或铬以及中药等进行治疗,但由于子宫复旧的机理尚不明确,这些药物疗效均不明显或个体差异较大。脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌的主要毒性成分,能在体外诱导子宫内膜细胞发生炎症反应,松弛素(RLX)可抑制妊娠期的子宫收缩,抑制胶原降解,导致子宫复旧不良。本试验通过对产后小鼠子宫分别灌注LPS和RLX,建立两种子宫复旧不良模型,通过比较其与正常子宫复旧的小鼠体内多种甾体类激素和部分炎性细胞因子的变化规律,LPS和RLX两者对细胞凋亡及PI3K/Akt信号通路中相关凋亡因子的mRNA和蛋白表达的影响来探讨这些激素与因子在子宫复旧过程中的作用,为子宫复旧不良的防治提供相关理论基础。通过对产后小鼠子宫组织中相关因子蛋白变化的研究,找出子宫复旧的作用机制,对预防、治疗奶牛产后子宫复旧不良具有重要意义。主要研究内容和结果如下:1.LPS和RLX对产后小鼠子宫组织的影响将 105 只产后小鼠分成 PBS、LPS(20 μL,2.5mg/mL)和 RLX(2 mL,1.25μg/mL)3组,每组35只,产后当天为第0 d。分别在产后第0 d、第2 d、第4 d、第6d和第8d进行子宫灌注处理,每天每组7只。次日上午采血后处死,采集小鼠子宫进行称重等测量,同时进行HE染色观察子宫组织的变化。结果发现RLX处理后小鼠子宫重量在产后中期显著高于对照组(P<0.05),子宫长度和宽度在子宫复旧后期极显著高于对照组(P<0.01);LPS处理组仅在复旧后期子宫体宽度极显著高于对照组(P<0.01),长度与重量则无显著差异。HE染色发现LPS和RLX均能导致一定程度的子宫复旧不良,其中LPS主要导致子宫内膜上皮更新迟缓,影响动脉血流等,RLX组复旧不良主要集中在子宫体收缩不全、恶露排出不及时等方面。2.LPS和RLX对产后小鼠甾体类激素和炎性因子分泌的调控作用血液离心,分离上清,利用ELISA法检测小鼠血清中雌二醇(E2)和孕酮(P4)的浓度以及小鼠子宫组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)的浓度。结果发现,与PBS组相比,LPS组和RLX组在产后第8 d时雌激素浓度均显著高于对照组,其中RLX组差异极显著(P<0.01);LPS组对孕酮的分泌没有显著影响;而RLX组孕酮浓度在第0-4 d期间显著上升。此外,LPS组的TNF-α浓度显著高于PBS组(P<0.05),而RLX组的IL-1β浓度则显著低于PBS组(P<0.05)。3.LPS和RLX对细胞凋亡和PI3K/AKT信号通路中细胞凋亡相关基因表达的影响TUNEL法检测子宫组织细胞凋亡情况,结果发现与对照组相比,LPS组子宫内膜与肌层部分以及RLX组子宫内膜部分的凋亡细胞数量较多。Real-time PCR法检测PI3K/Akt信号通路中细胞凋亡相关基因mRNA的表达,免疫组织化学染色法及免疫印迹法检测凋亡相关蛋白的表达。结果发现LPS组Bax和FoxO1 mRNA与蛋白的表达量均极显著升高(P<0.01);Akt、Bim和Bcl-2mRNA的表达量在复旧末期时显著上升(P<0.05);Bim蛋白的表达显著升高(P<0.05)。RLX组AktmRNA的表达量极显著升高(P<0.01);Bax mRNA的表达量在复旧初期极显著降低(P<0.01),中后期极显著升高(P<0.01);FoxO1 mRNA的表达显著升高(P<0.05),蛋白表达量在后期极显著降低(P<0.01);Bcl-2 mRNA的表达极显著降低(P<0.01),中后期显著升高(P<0.05);Bim的蛋白表达量在复旧初期极显著升高(P<0.01)。综上所述,脂多糖能够引发炎症反应甚至导致子宫内膜炎发生,其通过下调PI3K/Akt信号通路中Akt的表达,解除对FoxO1的抑制作用,从而调节促凋亡信号,同时上调Bax表达,促进子宫组织细胞尤其是子宫内膜上皮细胞凋亡,使其不能及时完成更新与修复,从而导致子宫复旧不良。RLX在产后中末期通过上调Bax的表达促进子宫组织细胞凋亡,同时影响子宫体肌肉的收缩能力,使得恶露等内容物不能及时排出造成子宫复旧不良,并且对白介素1β的分泌具有一定的抑制作用,这可能与某些抗炎机制有关。