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2,3-双脱氧腺苷(2,3dideoxyadenosine)具有良好的抗病毒作用。本论文研究了2,3-双脱氧腺苷的化学酶法合成。
以胸苷为起始原料,经由酰化、环化、开环、催化加氢生成2,3-双脱氧胸苷,步骤最简单、试剂较易获得,产率较高达到24.6%。
本研究以胡萝卜软腐欧文氏杆菌完整细胞为酶源,利用其细胞内的胸苷磷酸化酶和嘌呤核苷磷酸化酶催化的藕联反应合成双脱氧腺苷,并优化了酶反应的条件,结果显示其最佳酶反应条件如下:反应温度55℃,磷酸盐缓冲液pH值8.0,磷酸盐缓冲液浓度50mmol/L,底物20mmol/L,菌体量10%时,48h转化率达54.2%,具有较好应用前景。
为了进一步缩短反应时间和提高转化率,应用高表达胸苷磷酸化酶和嘌呤核苷磷酸化酶的大肠杆菌基因工程菌株作为酶源进行催化,当底物双脱氧胸苷浓度为40mmol/L,腺嘌呤20mmol/L,添加5%嘌呤核苷磷酸化酶菌体和10%胸苷磷酸化酶菌体,在pH7.0左右,50mmol/L磷酸钾缓冲液中,50℃下,反应5~6h。转化率达60%。与使用野生型菌株相比,反应缩短了40小时,大大提高了酶促转化的效率,转化率也有一定程度的提高。