调脂颗粒醇提物对LO-2人肝细胞株B类Ⅰ型清道夫受体的调控研究

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目的:B类Ⅰ型清道夫受体(scavenger receptor class B typeⅠ,SR-BⅠ)作为高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)第一个在分子水平上确定的受体,与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的发生和发展有着密切的关系。本实验主要研究吴门调脂颗粒醇提物对LO-2人肝细胞株SR-BⅠ启动子活性、mRNA和蛋白表达的影响。  方法:把30只350±10g成年健康雄性(Sprague Dawley,SD)大鼠随机分为6组,依次为空白对照组、阳性对照组(阿托伐他汀溶液)、调脂颗粒总方醇提物组、蒲黄醇提物组、姜黄醇提物组、泽泻醇提物组,予制备好的药物灌胃三天后,腹主动脉采血,获得每组的含药血清。人肝细胞LO-2随机分为14组:(1)空白对照组,(2)阳性对照组(阿托伐他汀含药血清组),(3)调脂颗粒总方醇提物含药血清高剂量组,(4)调脂颗粒总方醇提物含药血清中剂量组,(5)调脂颗粒总方醇提物含药血清低剂量组,(6)蒲黄醇提物含药血清高剂量组,(7)蒲黄醇提物含药血清中剂量组,(8)蒲黄醇提物含药血清低剂量组,(9)姜黄醇提物含药血清高剂量组,(10)姜黄醇提物含药血清中剂量组,(11)姜黄醇提物含药血清低剂量组,(12)泽泻醇提物含药血清高剂量组,(13)泽泻醇提物含药血清中剂量组,(14)泽泻醇提物含药血清低剂量组。用含药血清和DMEM培养液配制不同浓度的含药血清细胞培养液,培养LO-2细胞48小时。共转染SR-BⅠ重组质粒和pRL-TK质粒,双荧光素酶报告基因法检测SR-BⅠ启动子活性的变化;提取细胞总RNA,用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术检测SR-BⅠ mRNA的表达差异;提取细胞总蛋白,用Western blot方法检测SR-BⅠ蛋白表达的变化。  结果:与空白组对照组相比,阳性对照组他汀、调脂颗粒总方醇提物高中低剂量组及蒲黄醇提物高剂量组均能上调SR-BⅠ启动子活性(P<0.05)、mRNA(P<0.05)和蛋白质的表达(P<0.05),且呈浓度依赖性;而姜黄醇提物、泽泻醇提物高中低剂量组与空白组比较均无显著差异。调脂颗粒总方醇提物中剂量组优于姜黄、泽泻醇提物的高中低剂量组和蒲黄的中低剂量组(P<0.05),说明调脂颗粒总方的整体效果要优于单药蒲黄、姜黄、泽泻各自单独作用。另外,蒲黄醇提物高剂量组明显优于蒲黄醇提物的中低剂量组和姜黄、泽泻醇提物高中低剂量组(P<0.05),由此我们可以得出,调脂颗粒总方中更有效的药物是蒲黄,全方中蒲黄可能起到了主要作用。  结论:调脂颗粒总方醇提物及蒲黄醇提物均能上调SR-BⅠ的表达,且以总方的作用更优。蒲黄醇提物对SR-BⅠ的调节作用明显优于姜黄、泽泻醇提物,说明全方中蒲黄醇提物可能起到了主要作用。三个单药效果均不及全方,反映出调脂颗粒全方的整体作用明显优于蒲黄、姜黄、泽泻各自单独作用,验证了调脂颗粒组方的合理性,为调脂颗粒的临床应用提供了部分依据。
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