胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,APP）是引起猪传染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropneumonia,PCP）的主要病原,在全世界范围内广泛流行,给我国生物安全带来严重威胁,给集约化养猪业带来巨大损失,是国际公认的危害现代养猪业的重要病害之一。QseBC双组份调控系统是APP的五对双组份之一,发挥着群体感应的作用,可调控细菌多种行为变化。本研究通过转录组测序（RNA-seq）、荧光定量PCR（q-PCR）和凝胶迁移试验（EMSA）等技术确定QseBC双组份系统可以直接调控下游基因apf基因簇（apf ABCD）。使用下游基因缺失突变株Δapf A、Δapf B、Δapf C和Δapf D及相应互补株验证QseBC双组份系统的相关功能,阐明QseBC双组份系统调控apf基因簇对APP毒力等相关生物学功能的影响。具体研究内容如下:1.转录组测序数据分析本研究选取Fold change≥1.5且p≤0.001的基因作为胸膜肺炎放线杆菌1型基因缺失突变株Δqse BC与野生株样品间的差异表达基因,共计51个,其中表达上调的有24个,表达下调的有27个。我们对这些基因的主要特征进行了分析,具体描述如下:表达下调基因大多和毒力相关,主要编码黏附因子生物蛋白、编码铁代谢相关蛋白、参与甘油代谢、参与运输和DNA摄取;表达上调基因主要参与氨基酸代谢、无机离子代谢、生物被膜形成、信号转导、转录激活、DNA重组和未知功能。2.胸膜肺炎放线杆菌QseBC双组份系统可以直接调控apf基因簇本研究利用RNA-seq初步筛选出胸膜肺炎放线杆菌1型基因缺失突变株Δqse BC与野生株样品间的差异表达基因,并使用q RT-PCR技术对RNA-seq结果的可靠性进行验证。通过EMSA试验,我们发现反应调节蛋白Qse B可与apf基因簇启动子片段结合,这表明QseBC双组份系统可以直接调控apf基因簇。3.QseBC双组份系统调控apf基因簇影响APP毒力等相关生物学功能通过生物学特性分析、细胞试验、动物试验等,利用下游基因缺失突变株Δapf A、Δapf B、Δapf C和Δapf D及相应互补株验证QseBC双组份系统的相关功能。我们发现,当上述基因缺失后,基因缺失突变株在体外应激条件下的存活能力相对野生株下降34.65%,生物被膜形成能力下降29.68%;被细胞吞噬的比例上升42.85%,黏附细胞的能力下降39.58%,侵入细胞的能力下降45.69%;接种基因缺失突变株的小鼠存活率上升279.93%,肺脏组织载菌量下降79.95倍,血液组织载菌量下降319.45倍。这表明QseBC双组份系统调控apf基因簇可显著降低APP对体外应激的抵抗力、生物被膜形成能力、抗细胞吞噬能力、黏附能力、侵入能力、毒力和定植能力等。因此,QseBC双组份系统可影响apf基因簇的表达,介导APP黏附和侵入,从而建立感染。