【研究背景与目的】动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是一种以脂质在血管壁蓄积为主要特征的复杂病变过程,是缺血性脑卒中、急性冠脉综合征等重大心脑血管疾病的共同病理基础。AS病灶处常出现微环境酸化（p H＜7.0）,新近研究发现该微环境酸化在促AS病变中起到关键作用,但作用机制尚不清楚。酸敏感离子通道1（Acid-sensing ion channel 1,ASIC1）是细胞感受胞外升高H+的关键感受器,其通过调控细胞自噬、增殖和脂质代谢等生物学行为参与机体的生理与病理生理过程。我们前期研究表明,ASIC1可以抑制巨噬细胞胆固醇流出,促进脂质的蓄积,但其在AS中的机制有待进一步阐明。本研究将从小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞、AS动物模型、人体AS斑块三个层次,探讨AS斑块内巨噬细胞是否高表达ASIC1与发生脂噬障碍,并揭示ASIC1是否与受体相互作用蛋白1（Receptor-interacting protein 1,RIP1）互作抑制巨噬细胞脂噬促进AS。ASIC1有望成为防治AS疾病的新靶点。【方法】1.获取人体主动脉血管AS病变组织与临近非AS组织,油红O（ORO）染色检测血管壁的脂质蓄积,免疫荧光染色检测血管壁ASIC1和巨噬细胞CD68蛋白的表达,以及ASIC1与CD68的定位。2.构建Apo E-/-小鼠AS模型,使用LV-ASIC1 si RNA或RIP1选择性抑制剂Nec-1干预12周后,ORO染色观察主动脉窦及主动脉树AS病变。免疫荧光染色检测血管壁ASIC1和巨噬细胞CD68蛋白共定位。3.透射电镜观察主动脉窦脂噬变化。4.免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜分别观察巨噬细胞源性泡沫细胞中的脂滴（BODIPY示踪）与自噬标志物LC3、溶酶体标志物LAMP1共定位。5.免疫共沉淀（Co-IP,co-inmunoprecipitation）检测ASIC1与RIP1蛋白相互作用;Western blot（WB）检测ASIC1、RIP1、p-RIP1、p-TFEB、LAMP1、LC3、p62等蛋白表达。6.RNA干扰:慢病毒ASIC1 si RNA转染Apo E-/-小鼠或RAW264.7巨噬细胞,以沉默ASIC1的表达。【结果】1.ASIC1在人体主动脉AS斑块中的巨噬细胞高表达荧光染色结果表明,与非AS病变组织相比较,AS斑块内的ASIC1和CD68荧光强度显著增加,且二者显著共定位。这表明ASIC1高表达于斑块内的巨噬细胞。2.AS斑块中的脂噬水平显著降低人体主动脉免疫荧光染色结果表明,与非AS病变组织相比较,AS斑块中LC3-BODIPY、LAMP1-BODIPY共定位明显减少,而细胞内的脂滴蓄积明显增加。透射电镜检测结果表明,Apo E-/-小鼠AS斑块中脂滴显著增加,脂噬体（包含脂滴的自噬体）的数量明显减少。这证明AS斑块中脂噬受抑。3.ASIC1与RIP1存在相互作用Co-IP结果表明,ASIC1可与RIP1相互作用,与对照组相比较,ox-LDL诱导组巨噬细胞ASIC1与RIP1蛋白相互作用显著增强。4.ASIC1/RIP1促进巨噬细胞的脂质蓄积ORO结果表明,与control组相比较,抑制ASIC1/RIP1蛋白互作显著减少ox-LDL诱导的巨噬细胞脂质蓄积。5.ASIC1/RIP1抑制巨噬细胞脂噬WB结果表明,ox-LDL诱导的巨噬细胞ASIC1、p-RIP1和p-TFEB蛋白水平显著增加,LC3II和LAMP1蛋白的表达显著减少。而ox-LDL对巨噬细胞的上述效应能被LV-ASIC1 si RNA和RIP-1抑制剂Nec-1所取消。激光共聚焦结果显示,与对照组相比较,抑制ASIC1/RIP1显著增加BODIPY-LC3、BODIPY-LAMP1的共定位。自噬溶酶体抑制剂氯喹（CQ）则可取消LV-ASIC1 si RNA和RIP1抑制剂Nec-1对巨噬细胞脂噬促进作用。这表明ox-LDL通过促进巨噬细胞ASIC1/RIP1蛋白互作抑制脂噬。6.ASIC1显著抑制Apo E-/-小鼠主动脉AS斑块的脂噬水平WB结果显示,与对照组相比较,LV-ASIC1 si RNA和Nec-1组的p-TFEB、P62水平显著减少,但LC3II/LC3I和LAMP1的表达明显增加。透射电镜结果显示,与对照组相比较,ASIC1 si RNA和Nec-1组斑块内包含脂滴的自噬体和自噬溶酶体数量明显增加。【结论】巨噬细胞ASIC1与RIP1相互作用抑制脂噬,促进细胞内的脂质蓄积和AS病变形成,ASIC1将是防治AS的新靶点。