论文部分内容阅读
摘要：地龙（鲜品）为“复方地龙胶囊”药品所需用的重要药材之一。由于中国药典并未收载“地龙（鲜品）”的质量标准，仅收载了干品的质量标准，因此本文重点描述如何建立“地龙（鲜品）”的质量标准。
关键词：地龙（鲜品）、质量标准
地龙（鲜品）为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum （E. Perrier）、通俗环毛蚓Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛蚓Pheretima guillelmi （Michaelsen）或栉盲环毛蚓Pheretima pectinifera Michaelsen的新鲜全体。前一种习称“广地龙”，后三种习称“沪地龙”。本文从湖北产地采收多个批次的地龙（鲜品），采收后置-20℃冷冻保存，解冻后使用。
【成分】 本品含地龙解热酶（Lumbrotebrine）、地龙素（Lumbritin）、地龙毒素（Terrestro-Lumbrolysin）、黄嘌呤（Xanthine）、腺嘌呤（Adenine）、鸟嘌呤（Guanine）、胆碱（Choline）、胍（Guanidine）。含水份70-90%，干品含蛋白质50-65%，脂肪10-20%，碳水化合物11-18%和灰分10-23%。其中地龙解热酶为有效的治疗成分。因此，本品标准的建立从性状、显微鉴别、薄层鉴别、活性等几个方面来研究。另外，水分、灰分、重金属等指标，因鲜品与干品无差异，可直接引用中国药典中干品的标准。
【样品情况】 收集样品共5批，其名称来源见下表。
【实验仪器与试剂】
OLYMPUS BH-2 DP-12显微数码摄像系统；水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
【性状】
呈长园柱形，长8～15cm，宽0.5～1.5cm。全体具环节，背部棕褐色至黄褐色，腹部浅黄棕色；第14～16环节为生殖带，较光亮。第18环节有一对雄生殖孔。雄交配腔能全部翻出，呈花菜状或阴茎状。受精囊孔3对，在6/7至8/9环节间。
通过上述性状观察判断，湖北产地的地龙均符合《中国药典》一部中“沪地龙”中的“通俗环毛蚓Pheretima vulgaris Chen”的描述。
【显微鉴别/薄层鉴别】
（1）取本品，干燥，粉碎，置显微镜下观察：斜纹肌纤维无色或淡棕色，直径4～36μm，肌纤维散在或相互绞结成片状，多稍弯曲，边缘常不平整。表皮细胞呈棕黄色，细胞界限不明显，布有暗棕色的色素颗粒，有的颗粒聚集成条状、网状。刚毛少见，常碎断散在，淡棕色或黃棕色，完整者细长，长350-400μm，中部直径24～50μm，一端平截，另端尾尖，表面光滑，有的表面可见纵裂纹。以上特征为其主要显微特征，
（2）参考《中国药典》2010年版一部中，地龙（干品）药材鉴别（3）。经采用不同的温湿度条件及不同的薄层板（青岛海洋产硅胶G预制薄层板与Merck产高效硅胶G预制薄层板）进行了比较。色谱条件：取本品5g剪碎，加三氯甲烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取地龙对照药材（中检院120987-201107）1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G板上，以甲苯-丙酮（9：1）为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
小结：不同品牌薄层板在相同的展开条件下，均能显示出对照药材位置颜色相一致的主斑点。分别采用供试品不同点样量（2？l 、5？l）进行比较，点样5？l，斑点清晰。
【活性测定】 由于地龙内含多种活性酶，为了便于检测，本文采取其有效成分之一尿激酶作为活性参照检测。初步拟定按地龙（鲜品）计算，每1g效价应不得少于300尿激酶单位。
（1）标准品溶液的制备 取尿激酶标准品，用0.1%明胶磷酸盐缓冲液制成浓度为每1ml中含15尿激酶单位的溶液。
（2）供试品溶液的制备 取本品适量，绞碎，称取50g，加水50ml，37℃水浴保温匀浆20小时，3000转/分离心20分钟，精密量取上清液1ml，置10ml量瓶，加0.1%明胶磷酸盐缓冲液稀释至10ml，即得。
（3）测定法 取直径约10cm表面皿1只，于10℃以下加3ml凝血酶溶液，再加纤维蛋白原溶液14ml，迅速混匀，于室温水平放置20分钟待凝结后，分别精密吸取标准品溶液、供试品溶液各10μl，点于上述纤维蛋白原平板上，于37℃保温5-6小时，取出要用卡尺测量溶圈垂直两直径，以溶圈垂直直径的乘积作为溶圈面积。供试品溶液的溶圈面积应大于标准品溶液的溶圈面积。
结论：经本文研究多批次地龙（鲜品）的研究，可确立沪地龙（鲜品）的质量标准：
参考文献：
[1]中国药典2015年版一部
[2]李时珍，本草纲目（校点本），（15），951，人民卫生出版社，1979。
[3]刘松青，马文秀等。高效液相色谱法测定地龙中次黄嘌呤和黄嘌呤的含量。华西药学杂志，1994，9（3）：179-181
[4]王光忠，邹阳等。薄层扫描法测定地龙类药材中琥珀酸的含量。药物分析杂志，1997，17（4）：274-275
[5]王光忠，陈平等。地龙类药材的理化鉴别。时珍国药研究，1997，8（2）：124-125
关键词：地龙（鲜品）、质量标准
地龙（鲜品）为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum （E. Perrier）、通俗环毛蚓Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛蚓Pheretima guillelmi （Michaelsen）或栉盲环毛蚓Pheretima pectinifera Michaelsen的新鲜全体。前一种习称“广地龙”，后三种习称“沪地龙”。本文从湖北产地采收多个批次的地龙（鲜品），采收后置-20℃冷冻保存，解冻后使用。
【成分】 本品含地龙解热酶（Lumbrotebrine）、地龙素（Lumbritin）、地龙毒素（Terrestro-Lumbrolysin）、黄嘌呤（Xanthine）、腺嘌呤（Adenine）、鸟嘌呤（Guanine）、胆碱（Choline）、胍（Guanidine）。含水份70-90%，干品含蛋白质50-65%，脂肪10-20%，碳水化合物11-18%和灰分10-23%。其中地龙解热酶为有效的治疗成分。因此，本品标准的建立从性状、显微鉴别、薄层鉴别、活性等几个方面来研究。另外，水分、灰分、重金属等指标，因鲜品与干品无差异，可直接引用中国药典中干品的标准。
【样品情况】 收集样品共5批，其名称来源见下表。
【实验仪器与试剂】
OLYMPUS BH-2 DP-12显微数码摄像系统；水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
【性状】
呈长园柱形，长8～15cm，宽0.5～1.5cm。全体具环节，背部棕褐色至黄褐色，腹部浅黄棕色；第14～16环节为生殖带，较光亮。第18环节有一对雄生殖孔。雄交配腔能全部翻出，呈花菜状或阴茎状。受精囊孔3对，在6/7至8/9环节间。
通过上述性状观察判断，湖北产地的地龙均符合《中国药典》一部中“沪地龙”中的“通俗环毛蚓Pheretima vulgaris Chen”的描述。
【显微鉴别/薄层鉴别】
（1）取本品，干燥，粉碎，置显微镜下观察：斜纹肌纤维无色或淡棕色，直径4～36μm，肌纤维散在或相互绞结成片状，多稍弯曲，边缘常不平整。表皮细胞呈棕黄色，细胞界限不明显，布有暗棕色的色素颗粒，有的颗粒聚集成条状、网状。刚毛少见，常碎断散在，淡棕色或黃棕色，完整者细长，长350-400μm，中部直径24～50μm，一端平截，另端尾尖，表面光滑，有的表面可见纵裂纹。以上特征为其主要显微特征，
（2）参考《中国药典》2010年版一部中，地龙（干品）药材鉴别（3）。经采用不同的温湿度条件及不同的薄层板（青岛海洋产硅胶G预制薄层板与Merck产高效硅胶G预制薄层板）进行了比较。色谱条件：取本品5g剪碎，加三氯甲烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取地龙对照药材（中检院120987-201107）1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G板上，以甲苯-丙酮（9：1）为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
小结：不同品牌薄层板在相同的展开条件下，均能显示出对照药材位置颜色相一致的主斑点。分别采用供试品不同点样量（2？l 、5？l）进行比较，点样5？l，斑点清晰。
【活性测定】 由于地龙内含多种活性酶，为了便于检测，本文采取其有效成分之一尿激酶作为活性参照检测。初步拟定按地龙（鲜品）计算，每1g效价应不得少于300尿激酶单位。
（1）标准品溶液的制备 取尿激酶标准品，用0.1%明胶磷酸盐缓冲液制成浓度为每1ml中含15尿激酶单位的溶液。
（2）供试品溶液的制备 取本品适量，绞碎，称取50g，加水50ml，37℃水浴保温匀浆20小时，3000转/分离心20分钟，精密量取上清液1ml，置10ml量瓶，加0.1%明胶磷酸盐缓冲液稀释至10ml，即得。
（3）测定法 取直径约10cm表面皿1只，于10℃以下加3ml凝血酶溶液，再加纤维蛋白原溶液14ml，迅速混匀，于室温水平放置20分钟待凝结后，分别精密吸取标准品溶液、供试品溶液各10μl，点于上述纤维蛋白原平板上，于37℃保温5-6小时，取出要用卡尺测量溶圈垂直两直径，以溶圈垂直直径的乘积作为溶圈面积。供试品溶液的溶圈面积应大于标准品溶液的溶圈面积。
结论：经本文研究多批次地龙（鲜品）的研究，可确立沪地龙（鲜品）的质量标准：
参考文献：
[1]中国药典2015年版一部
[2]李时珍，本草纲目（校点本），（15），951，人民卫生出版社，1979。
[3]刘松青，马文秀等。高效液相色谱法测定地龙中次黄嘌呤和黄嘌呤的含量。华西药学杂志，1994，9（3）：179-181
[4]王光忠，邹阳等。薄层扫描法测定地龙类药材中琥珀酸的含量。药物分析杂志，1997，17（4）：274-275
[5]王光忠，陈平等。地龙类药材的理化鉴别。时珍国药研究，1997，8（2）：124-125