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摘要：研究建立了一种绿茶中33种有机磷农药的检测方法。采用QuEChERS提取净化，气相色谱-串联质谱仪定量分析。在25.0～200.0 ?g/L质量浓度范围，有机磷的线性相关系数（R2）大于0.996;0.010～1.010 mg/kg加标水平下，平均回收率为87.5%～99.4%，相对标准偏差（RSD）为3.6%～6.8%（n=6），各农药定量限均为0.010 mg/kg。该方法简单快速、重复性好，适用于绿茶样品中有机磷的快速检测需求。
关键词：QuEChERS;气相色谱-串联质谱;农药残留
Determination of 33 Organophosphorus Pesticide
Residues in Green Tea Using QuEChERS-Gas
Chromatography-Tandem Mass Spectrometry
WANG Hongtao， BAI Zhiping， LI Feifei， HU Jieli， WANG Chengjun， XIONG Jiahui，
WANG Shuting， SUN Qingwen， LAN Mei， CHEN Hongkun
Sichuan Yibin Wuliangye Co.， Ltd.， Yibin 644007， China
Abstract： A multiresidue analytical method for the determination of 33 organophosphorus pesticide residues was
established in green tea. The samples were extracted and purified by using QuEChERS and quantified by triple-quad-
rupole mass spectrometry. The results indicated that the concentrations of 33 pesticide residues had good linearity
relationships in the range of 25.0 ～ 200.0 ?g/L， with the correlation coefficients （R2） above 0.996. The average
recovery at different spiking levels （0.010 ～ 1.010 mg/kg） was ranged from 87.5% to 99.4% with RSD （relative
standard deviation， n= 6） 3.59% ～ 6.75%. The LOQ （the limit of quantification） was 0.010 mg/kg. The method was
simple， quick， reliable and appropriate for the simultaneous analysis of multi- organophosphorus in green tea.
Keywords： QuEChERS， gas chromatography-tandem mass spectrometry， pesticide residue
我國是世界上最大的茶叶生产国，茶叶出口量居世界前三[1]。农药的应用，对提高茶叶产量，防治病虫害具有重要意义，但过度使用可导致茶叶中农药残留超标，危害人体健康，阻碍茶叶扩大出口。在各类农药中，有机磷类农药是我国常用农药之一，国家出台的农药残留最大限量推荐了茶叶农药残留标准26个[2]。茶叶中农药多残留检测的国标法及研究主要涉及液相色谱-质谱联用法、气相色谱-质谱联用法[3-6]。茶叶基质相对复杂，有机磷类农药是一类降解迅速，热不稳定性的农药，进一步提升了茶叶中有机磷类农药的检测难度。
茶叶农残检测前处理方法有固相萃取与QuEChERS[7-14]，QuEChERS 法快速、药剂使用量少[15]。QuEChERS净化剂有N-丙基乙二胺、无水硫酸镁、活性炭粉末等。N-丙基乙二胺主要用于去除有机酸、极性杂质、部分色素与糖类，无水硫酸镁起到去除水的效果。活性炭粉末对含苯环类物质有强吸附作用。
本研究以四川省宜宾市生产销售的绿茶为研究对象，选用农业农村部规定的甲胺磷、久效磷等7种禁限用有机磷农药[16]，敌敌畏、马拉硫磷等26种常用有机磷农药为研究对象，建立了一种基于QuEChERS提取净化，气相色谱-串联质谱联用的检测方法，可对绿茶中33种有机磷农药进行准确定性定量检测，为绿茶产品质量控制提供技术支撑。
一、材料与方法
1. 主要仪器设备
7890A气相色谱-串联质谱联用仪（美国Agilent公司）、HC3204电子天平（上海花潮电器有限公司）、KH22离心机（湖南凯达科学仪器有限公司）、超纯水机Plus-E3（南京易普易达科技发展有限公司）、涡旋混合仪SI-P246型（美国科学工业公司）、500A-JRABS粉碎仪（永康市云达机械设备厂）。
2. 主要材料与试剂
33种有机磷农药标准品（北京中科质检生物技术有限公司）;乙腈（色谱纯，成都市科隆化学品有限公司）;N-丙基乙二胺吸附剂;活性炭粉末（青岛邦凯高新技术材料有限公司）;无水硫酸镁（试剂级，北京利奇世纪化工有限公司）;纤维素滤膜 （广东环凯微生物科技有限公司）;注射器（2 mL，郑州康佳医疗器械有限公司）;离心管（50 mL，迈博瑞生物膜技术有限公司）。 3. 色谱分析条件
进样口：280 ℃，不分流，1 ?L进样量;分离柱：DB-1701（30 m ×250 ?m， 0.25 ?m）;流速：1.0 mL/min;辅助加热器：280 ℃。柱箱：初始40 ℃（1 min），30 ℃/min速率升至130 ℃，5 ℃/min速率升至310 ℃。
4. 质谱分析条件
离子源：280 ℃，四极杆温度：150 ℃，有机磷农药质谱参数设置见表1。
5. 样品前处理
（1）制样。取绿茶样品50 g，粉碎后-20 ℃保存。
（2）提取。取绿茶1.0 g、纯水10 mL、乙腈10 mL于50 mL离心管中，涡旋2 min。
（3）净化。50 mL离心管中加N-丙基乙二胺300 mg、活性炭粉末400 mg、无水硫酸镁1 200 mg，涡旋1 min，10 000 r/min离心5 min，过纤维素滤膜，待气相色谱-串联质谱检测。
6. 中间储备液的配制
中间标准储备液：将33种有机磷农药（100 ?g/mL）配制成质量浓度为1 ?g/mL中间标准储备液，-20 ℃保存。
二、结果与讨论
1. 线性回归方程和相关系数
取经测定不含有机磷农药的茶叶样品，按本研究方法處理，得到绿茶空白基质溶液。用空白基质溶液将1 000 ?g/L农药稀释成25 ?g/L、50 ?g/L、100 ?g/L、150 ?g/L、200 ?g/L线性工作液，供气相色谱-串联质谱测定得到各农药线性方程，线性方程及相关系数见表2。X为各农药质量浓度（?g/L），Y为响应值。
2. 基质效应
基质是指分析物以外的所有物质。基质标准曲线斜率与溶剂标准曲线斜率比大于1为基质增强，小于1为基质抑制[15-16]。本研究采用 25.0～200 ?g/L两曲线斜率比较，得到有机磷农药基质效应如图1。从图中可见，基质标准曲线斜率与溶剂标准曲线斜率比均大于1，表明33种有机磷均存在基质增强作用。因此，需采用空白基质配制标准溶液。
3. 回收率与精密度
取未施用农药的空白样品，设0.010 mg/kg、0.488 mg/kg、1.010 mg/kg的3级加标试验，得到有机磷农药的回收率及相对标准偏差（表3）。从表中可知，平均回收率在87.5% ～ 99.4%之间，相对标准偏差为3.6% ～ 6.8%（n=6），满足绿茶中33种农药的快速检测。不同添加水平下有机磷农药色谱图如图2，表明该方法有较高的回收率和较好的精密度，能够满足绿茶中有机磷农药的分析检测。
4. 市售绿茶样品的检测
应用本方法对200份市售绿茶样品进行检测，参试样品中33种有机磷农药的含量均小于0.010 mg/kg。
为验证方法的可靠性，进一步进行了茶园田间试验。在20 m2茶园内，对各农药按0.5 mg/m2施药，12 h后采集鲜叶并制成绿茶，同时样品加标0.010 mg/kg检测农残，检出结果如表4。
田间试验有机磷农药残留检出情况及添加回收率结果表明，施药12 h后，各有机磷含量在0.020 ～ 0.029 mg/kg，回收率大于86.4%，相对标准偏差（n=6）小于6.8%。表明本研究建立的方法可靠，能够应用于绿茶样品有机磷农药的检测。
三、结论
本研究建立了绿茶样品中33种有机磷农药组分的检测方法，使用该方法绿茶样品不需定量浓缩处理，各有机磷农药定量限为0.010 mg/kg，0.010 ～ 1.010 mg/kg加标水平下回收率、相对标准偏差满足痕量检测的要求。该方法检测耗时短、可靠性好，适用于测定茶叶中敌敌畏等33种有机磷农药的含量。
参考文献
[1] 冷杨， 尚怀国， 李莉. 2019年我国茶叶进出口贸易情况简析[J]. 中国茶叶， 2020， 42（3）： 28-30.
[2] 国家卫生健康委员会， 农业农村部， 国家市场监督管理总局. 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量： GB 2763—2019[S]. 北京： 中国农业出版社， 2019.
[3] 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会， 中华人民共和国农业部， 国家食品药品监督管理总局. 食品安全国家标准食品 茶叶中448种农药及其相关化学品残留量的测定 液相色谱-质谱法： GB 23200.13—2016[S]. 北京： 中国标准出版社， 2016.
[4] 中华人民共和国国家卫生健康委员会， 中华人民共和国农业农村部， 国家市场监督管理总局. 食品安全国家标准 植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定 气相色谱-质谱联用法： GB 23200.113—2018[S]. 北京： 中国农业出版社， 2018.
[5] 中华人民共和国国家质量监督检疫总局， 中国国家标准化管理委员会. 茶叶中519种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法： GB/T 23204—2008[S]. 北京： 中国标准出版社， 2008.
[6] 中华人民共和国国家质量监督检疫总局， 中国国家标准化管理委员会. 茶叶中农药多残留测定 气相色谱-质谱法： GB/T 23376—
2009[S]. 北京： 中国标准出版社， 2009.
[7] 王吉祥， 牛之瑞， 冯雷， 等. SPE-GC-MS/MS法测定茶叶中49种农药残留[J]. 食品研究与开发， 2017， 38 （13）： 173-178.
[8] 曾艳， 郎红， 杨巧慧， 等. 固相萃取-GC/LC-MS/MS 测定茶叶中79种农药残留[J]. 茶叶科学， 2019， 39（5）： 576-586.
[9] 李福敏， 邵林. QuEChERS-气相色谱-三重四级杆串联质谱法测定茶叶中的12种有机氯农药残留[J]. 食品安全质量检测学报， 2018， 9（6）： 1377-1382.
[10] 陈昌梅， 林明霞， 兰元. SPE-GC-MS/MS法测定茶叶中的76种农药残留[J]. 中国茶叶， 2020， 42（12）： 52-61.
[11] 段联勃， 徐丹， 高水丽. QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定茶叶中氟虫胺[J]. 中国茶叶，2019， 41（12）： 26-29， 35.
[12] 朱雪琴， 赵薇， 陈坦林， 等. 改良QuEChERS法提取-气相色谱-火焰光度检测同时测定茶叶中5种有机磷农药残留[J]. 分析测试学报， 2018， 34（2）： 176-180.
[13] 崔鹏， 马晶， 孙谦. GC-MS/MS结合改进的QuEChERS方法测定茶叶中多农药残留[J]. 环境化学， 2018， 37（5）： 1175-1178.
[14] 卢森华， 梁爽， 黎强， 等. QuEChERS法与传统固相萃取法对比检测茶叶中25种农药[J]. 湖北农业科学， 2019， 58（23）： 176-181，188.
[15] 徐炎炎， 李森， 张芹， 等. 气质联用和液质联用中基质效应的分析和总结[J]. 农药， 2017， 56（3）： 162-165.
[16] 周利. 茶叶中禁限用农药和化学品名单[J]. 中国茶叶， 2019， 41（4）： 51.
关键词：QuEChERS;气相色谱-串联质谱;农药残留
Determination of 33 Organophosphorus Pesticide
Residues in Green Tea Using QuEChERS-Gas
Chromatography-Tandem Mass Spectrometry
WANG Hongtao， BAI Zhiping， LI Feifei， HU Jieli， WANG Chengjun， XIONG Jiahui，
WANG Shuting， SUN Qingwen， LAN Mei， CHEN Hongkun
Sichuan Yibin Wuliangye Co.， Ltd.， Yibin 644007， China
Abstract： A multiresidue analytical method for the determination of 33 organophosphorus pesticide residues was
established in green tea. The samples were extracted and purified by using QuEChERS and quantified by triple-quad-
rupole mass spectrometry. The results indicated that the concentrations of 33 pesticide residues had good linearity
relationships in the range of 25.0 ～ 200.0 ?g/L， with the correlation coefficients （R2） above 0.996. The average
recovery at different spiking levels （0.010 ～ 1.010 mg/kg） was ranged from 87.5% to 99.4% with RSD （relative
standard deviation， n= 6） 3.59% ～ 6.75%. The LOQ （the limit of quantification） was 0.010 mg/kg. The method was
simple， quick， reliable and appropriate for the simultaneous analysis of multi- organophosphorus in green tea.
Keywords： QuEChERS， gas chromatography-tandem mass spectrometry， pesticide residue
我國是世界上最大的茶叶生产国，茶叶出口量居世界前三[1]。农药的应用，对提高茶叶产量，防治病虫害具有重要意义，但过度使用可导致茶叶中农药残留超标，危害人体健康，阻碍茶叶扩大出口。在各类农药中，有机磷类农药是我国常用农药之一，国家出台的农药残留最大限量推荐了茶叶农药残留标准26个[2]。茶叶中农药多残留检测的国标法及研究主要涉及液相色谱-质谱联用法、气相色谱-质谱联用法[3-6]。茶叶基质相对复杂，有机磷类农药是一类降解迅速，热不稳定性的农药，进一步提升了茶叶中有机磷类农药的检测难度。
茶叶农残检测前处理方法有固相萃取与QuEChERS[7-14]，QuEChERS 法快速、药剂使用量少[15]。QuEChERS净化剂有N-丙基乙二胺、无水硫酸镁、活性炭粉末等。N-丙基乙二胺主要用于去除有机酸、极性杂质、部分色素与糖类，无水硫酸镁起到去除水的效果。活性炭粉末对含苯环类物质有强吸附作用。
本研究以四川省宜宾市生产销售的绿茶为研究对象，选用农业农村部规定的甲胺磷、久效磷等7种禁限用有机磷农药[16]，敌敌畏、马拉硫磷等26种常用有机磷农药为研究对象，建立了一种基于QuEChERS提取净化，气相色谱-串联质谱联用的检测方法，可对绿茶中33种有机磷农药进行准确定性定量检测，为绿茶产品质量控制提供技术支撑。
一、材料与方法
1. 主要仪器设备
7890A气相色谱-串联质谱联用仪（美国Agilent公司）、HC3204电子天平（上海花潮电器有限公司）、KH22离心机（湖南凯达科学仪器有限公司）、超纯水机Plus-E3（南京易普易达科技发展有限公司）、涡旋混合仪SI-P246型（美国科学工业公司）、500A-JRABS粉碎仪（永康市云达机械设备厂）。
2. 主要材料与试剂
33种有机磷农药标准品（北京中科质检生物技术有限公司）;乙腈（色谱纯，成都市科隆化学品有限公司）;N-丙基乙二胺吸附剂;活性炭粉末（青岛邦凯高新技术材料有限公司）;无水硫酸镁（试剂级，北京利奇世纪化工有限公司）;纤维素滤膜 （广东环凯微生物科技有限公司）;注射器（2 mL，郑州康佳医疗器械有限公司）;离心管（50 mL，迈博瑞生物膜技术有限公司）。 3. 色谱分析条件
进样口：280 ℃，不分流，1 ?L进样量;分离柱：DB-1701（30 m ×250 ?m， 0.25 ?m）;流速：1.0 mL/min;辅助加热器：280 ℃。柱箱：初始40 ℃（1 min），30 ℃/min速率升至130 ℃，5 ℃/min速率升至310 ℃。
4. 质谱分析条件
离子源：280 ℃，四极杆温度：150 ℃，有机磷农药质谱参数设置见表1。
5. 样品前处理
（1）制样。取绿茶样品50 g，粉碎后-20 ℃保存。
（2）提取。取绿茶1.0 g、纯水10 mL、乙腈10 mL于50 mL离心管中，涡旋2 min。
（3）净化。50 mL离心管中加N-丙基乙二胺300 mg、活性炭粉末400 mg、无水硫酸镁1 200 mg，涡旋1 min，10 000 r/min离心5 min，过纤维素滤膜，待气相色谱-串联质谱检测。
6. 中间储备液的配制
中间标准储备液：将33种有机磷农药（100 ?g/mL）配制成质量浓度为1 ?g/mL中间标准储备液，-20 ℃保存。
二、结果与讨论
1. 线性回归方程和相关系数
取经测定不含有机磷农药的茶叶样品，按本研究方法處理，得到绿茶空白基质溶液。用空白基质溶液将1 000 ?g/L农药稀释成25 ?g/L、50 ?g/L、100 ?g/L、150 ?g/L、200 ?g/L线性工作液，供气相色谱-串联质谱测定得到各农药线性方程，线性方程及相关系数见表2。X为各农药质量浓度（?g/L），Y为响应值。
2. 基质效应
基质是指分析物以外的所有物质。基质标准曲线斜率与溶剂标准曲线斜率比大于1为基质增强，小于1为基质抑制[15-16]。本研究采用 25.0～200 ?g/L两曲线斜率比较，得到有机磷农药基质效应如图1。从图中可见，基质标准曲线斜率与溶剂标准曲线斜率比均大于1，表明33种有机磷均存在基质增强作用。因此，需采用空白基质配制标准溶液。
3. 回收率与精密度
取未施用农药的空白样品，设0.010 mg/kg、0.488 mg/kg、1.010 mg/kg的3级加标试验，得到有机磷农药的回收率及相对标准偏差（表3）。从表中可知，平均回收率在87.5% ～ 99.4%之间，相对标准偏差为3.6% ～ 6.8%（n=6），满足绿茶中33种农药的快速检测。不同添加水平下有机磷农药色谱图如图2，表明该方法有较高的回收率和较好的精密度，能够满足绿茶中有机磷农药的分析检测。
4. 市售绿茶样品的检测
应用本方法对200份市售绿茶样品进行检测，参试样品中33种有机磷农药的含量均小于0.010 mg/kg。
为验证方法的可靠性，进一步进行了茶园田间试验。在20 m2茶园内，对各农药按0.5 mg/m2施药，12 h后采集鲜叶并制成绿茶，同时样品加标0.010 mg/kg检测农残，检出结果如表4。
田间试验有机磷农药残留检出情况及添加回收率结果表明，施药12 h后，各有机磷含量在0.020 ～ 0.029 mg/kg，回收率大于86.4%，相对标准偏差（n=6）小于6.8%。表明本研究建立的方法可靠，能够应用于绿茶样品有机磷农药的检测。
三、结论
本研究建立了绿茶样品中33种有机磷农药组分的检测方法，使用该方法绿茶样品不需定量浓缩处理，各有机磷农药定量限为0.010 mg/kg，0.010 ～ 1.010 mg/kg加标水平下回收率、相对标准偏差满足痕量检测的要求。该方法检测耗时短、可靠性好，适用于测定茶叶中敌敌畏等33种有机磷农药的含量。
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[12] 朱雪琴， 赵薇， 陈坦林， 等. 改良QuEChERS法提取-气相色谱-火焰光度检测同时测定茶叶中5种有机磷农药残留[J]. 分析测试学报， 2018， 34（2）： 176-180.
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