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摘要：目的 观察六黄合剂对胰岛素抵抗（IR）大鼠血管内皮细胞的影响，探讨其保护血管内皮的作用机制。方法 健康SD大鼠32只，按体质量随机分为正常组、模型组、罗格列酮组和六黄合剂组，每组8只。应用地塞米松诱导IR大鼠模型，造模同时灌胃给药，罗格列酮组和六黄合剂组分别给予罗格列酮3 mg/（kg·d）和六黄合剂6.3 g/（kg·d）干预，正常组和模型组给予等体积蒸馏水，14 d后应用化学比色法测定大鼠脂代谢指标及血清一氧化氮（NO）的水平，应用透射电镜观察胸主动脉内皮细胞超微结构的变化。结果 与模型组比较，六黄合剂组血清三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和游离脂肪酸（FFA）水平明显下降（P<0.01），血清总胆固醇（TC）水平下降（P<0.05），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平升高（P>0.05），血清NO水平明显升高（P<0.01）。电镜观察，IR大鼠胸主动脉内皮细胞超微结构发生明显病理改变。六黄合剂干预后，胸主动脉内皮细胞超微结构明显改善。结论 六黄合剂能有效调节IR大鼠血脂水平，增加血清NO含量，改善IR早期大动脉内皮细胞的病理损害。
关键词：六黄合剂；胰岛素抵抗；血管内皮细胞；一氧化氮；超微结构；大鼠
研究表明，血管内皮的损伤与胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）的关系密切，内皮功能障碍与IR之间具有相互影响、相互促进的作用，共同促进代谢综合征和心血管疾病的发生发展[1]。我们前期研究表明，六黄合剂能够增强IR大鼠的胰岛素敏感性[2]。本研究进一步应用透射电镜观察该复方对IR大鼠胸主动脉内皮细胞的影响，探讨其保护血管内皮
基金项目：辽宁卫生职业技术学院科学研究基金重点项目 （2012Z06）
的作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
健康清洁级SD大鼠32只，雌雄各半，体质量180～220 g，中国医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK（辽）2008-0005。所有大鼠均适应性喂养2周，自由摄水，标准饲料喂养，明暗周期为12 h（7：00-19：00），温度控制在（23±2）℃，相对湿度（55±5）%。将动物随机分为正常组、模型组、罗格列酮组和六黄合剂组，每组8只。
1.2 药物、仪器与试剂
721E型可见光分光光度计，上海光谱仪器有限公司；JEM-1200EX型透射电镜，日本JEOL公司；六黄合剂由黄芪、黄精、姜黄、蒲黄、黄连和大黄按适当比例煎制而成，药材购自沈阳市医药公司；马来酸罗格列酮片（葛兰素史克天津有限公司）；地塞米松磷酸钠注射液（郑州卓峰制药有限公司）；总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、游离脂肪酸（FFA）、一氧化氮（NO）等检测试剂盒，均为南京建成生物工程研究所产品。
1.3 造模与给药
参照文献[3]方法，应用地塞米松诱导IR模型。模型组、罗格列酮组、六黄合剂组大鼠肌注地塞米松磷酸钠注射液，剂量为1 mg/kg，隔日注射1次，共7次；正常组肌注等体积生理盐水。在造模的同时，六黄合剂组予六黄合剂6.3 g/kg灌胃[4]，罗格列酮组予罗格列酮3 mg/kg灌胃，正常组和模型组灌胃等体积蒸馏水，给药容量为10 mL/kg，连续14 d。
1.4 指标检测
第15日，大鼠禁食12 h后，断头取血，离心，分离血清， -20 ℃保存，待测空腹血清TG、TC、HDL-C、LDL-C、FFA和NO含量，按试剂盒说明书测定。
1.5 电镜观察
2.2 胸主动脉内皮细胞超微结构观察
3 讨论
前期研究表明，六黄合剂能够改善地塞米松诱导的IR大鼠的糖耐量异常，降低血清胰岛素水平，增强胰岛素的敏感性[2]。本研究进一步观察到，给予六黄合剂治疗后，IR大鼠的脂代谢明显改善，与模型组比较，血清TG、TC、LDL-C、FFA水平下降，HDL-C水平升高，血清NO水平明显升高。电镜观察结果表明，IR状态下，大鼠胸主动脉内皮细胞超微结构发生病理改变，主要表现为内皮细胞膜不完整，线粒体肿胀，嵴溶解，呈空泡样；基膜不连续；弹力纤维和胶原纤维排列紊乱。使用六黄合剂干预后，大鼠胸主动脉内皮细胞超微结构趋于正常，表现为内皮细胞排列紧密，细胞膜完整，线粒体和内质网结构正常，内皮下结构连续完整。
关键词：六黄合剂；胰岛素抵抗；血管内皮细胞；一氧化氮；超微结构；大鼠
研究表明，血管内皮的损伤与胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）的关系密切，内皮功能障碍与IR之间具有相互影响、相互促进的作用，共同促进代谢综合征和心血管疾病的发生发展[1]。我们前期研究表明，六黄合剂能够增强IR大鼠的胰岛素敏感性[2]。本研究进一步应用透射电镜观察该复方对IR大鼠胸主动脉内皮细胞的影响，探讨其保护血管内皮
基金项目：辽宁卫生职业技术学院科学研究基金重点项目 （2012Z06）
的作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
健康清洁级SD大鼠32只，雌雄各半，体质量180～220 g，中国医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK（辽）2008-0005。所有大鼠均适应性喂养2周，自由摄水，标准饲料喂养，明暗周期为12 h（7：00-19：00），温度控制在（23±2）℃，相对湿度（55±5）%。将动物随机分为正常组、模型组、罗格列酮组和六黄合剂组，每组8只。
1.2 药物、仪器与试剂
721E型可见光分光光度计，上海光谱仪器有限公司；JEM-1200EX型透射电镜，日本JEOL公司；六黄合剂由黄芪、黄精、姜黄、蒲黄、黄连和大黄按适当比例煎制而成，药材购自沈阳市医药公司；马来酸罗格列酮片（葛兰素史克天津有限公司）；地塞米松磷酸钠注射液（郑州卓峰制药有限公司）；总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、游离脂肪酸（FFA）、一氧化氮（NO）等检测试剂盒，均为南京建成生物工程研究所产品。
1.3 造模与给药
参照文献[3]方法，应用地塞米松诱导IR模型。模型组、罗格列酮组、六黄合剂组大鼠肌注地塞米松磷酸钠注射液，剂量为1 mg/kg，隔日注射1次，共7次；正常组肌注等体积生理盐水。在造模的同时，六黄合剂组予六黄合剂6.3 g/kg灌胃[4]，罗格列酮组予罗格列酮3 mg/kg灌胃，正常组和模型组灌胃等体积蒸馏水，给药容量为10 mL/kg，连续14 d。
1.4 指标检测
第15日，大鼠禁食12 h后，断头取血，离心，分离血清， -20 ℃保存，待测空腹血清TG、TC、HDL-C、LDL-C、FFA和NO含量，按试剂盒说明书测定。
1.5 电镜观察
2.2 胸主动脉内皮细胞超微结构观察
3 讨论
前期研究表明，六黄合剂能够改善地塞米松诱导的IR大鼠的糖耐量异常，降低血清胰岛素水平，增强胰岛素的敏感性[2]。本研究进一步观察到，给予六黄合剂治疗后，IR大鼠的脂代谢明显改善，与模型组比较，血清TG、TC、LDL-C、FFA水平下降，HDL-C水平升高，血清NO水平明显升高。电镜观察结果表明，IR状态下，大鼠胸主动脉内皮细胞超微结构发生病理改变，主要表现为内皮细胞膜不完整，线粒体肿胀，嵴溶解，呈空泡样；基膜不连续；弹力纤维和胶原纤维排列紊乱。使用六黄合剂干预后，大鼠胸主动脉内皮细胞超微结构趋于正常，表现为内皮细胞排列紧密，细胞膜完整，线粒体和内质网结构正常，内皮下结构连续完整。