【摘 要】
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目的:内皮细胞损伤是动脉粥样硬化的起始因素之一。姜黄素作为一种非特异性抗氧化和抗炎药物,已广泛应用于脂代谢紊乱疾病的研究。然而,姜黄素是否能减轻H2O2诱导的内皮细胞损伤及其相关机制尚不清楚。因此,本项目旨在探究姜黄素对人脐静脉内皮细胞的保护作用及其机制。方法:通过H2O2建立内皮细胞损伤模型,筛选出姜黄素的作用浓度和时间;HE染色探究姜黄素对内皮细胞的形态学的影响;Western Blot检测炎
【基金项目】
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湖南省自然基金项目（No 2018JJ2348,No 2018JJ2346）；
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目的:内皮细胞损伤是动脉粥样硬化的起始因素之一。姜黄素作为一种非特异性抗氧化和抗炎药物,已广泛应用于脂代谢紊乱疾病的研究。然而,姜黄素是否能减轻H2O2诱导的内皮细胞损伤及其相关机制尚不清楚。因此,本项目旨在探究姜黄素对人脐静脉内皮细胞的保护作用及其机制。方法:通过H2O2建立内皮细胞损伤模型,筛选出姜黄素的作用浓度和时间;HE染色探究姜黄素对内皮细胞的形态学的影响;Western Blot检测炎症小体NLRP3和细胞焦亡相关蛋白的表达,PI和TUNEL染色分别观察细胞膜和DNA的完整性;ELISA检测IL-1β和IL-18的释放;免疫荧光和Western Blot分别检测整合素α-V/β-3复合体（integrin alpha-V/beta-3,αvβ3）和内皮素-1（endothelin-1,ET-1）的表达;加入caspase-1的抑制剂VX-765和NLRP3的抑制剂MCC950作为阴性对照。结果:（1）H2O2建立内皮细胞损伤模型,根据MTT分析结果,筛选出H2O2的最佳浓度和时间分别为800μmol/L和3 h,筛选出姜黄素的作用浓度和时间分别为25μmol/L和3 h;（2）HE染色结果显示,H2O2处理导致内皮细胞膜破裂和细胞核浓缩,而姜黄素可抗H2O2诱导的内皮细胞损伤;（3）蛋白质免疫印迹结果显示,与H2O2组比较,姜黄素减少人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）中caspase-1、GSDMD和IL-1β的表达;caspase-1/TUNEL双染色结果显示,姜黄素减少caspase-1和TUNEL双染色的阳性细胞;姜黄素降低了HUVECs的PI染色的荧光强度以及IL-1β、IL-18和LDH的释放;（4）蛋白质免疫印迹检测NLRP3和含有CARD的凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC）显示,姜黄素能够降低炎症小体NLRP3、ASC的表达,减少细胞焦亡相关蛋白caspase-1、GSDMD和IL-1β的表达,同时PI、TUNEL染色的荧光强度以及炎症因子IL-1β和IL-18的释放均降低。（5）免疫荧光结果显示,姜黄素增加αvβ3的表达;蛋白质免疫印迹结果显示,姜黄素降低ET-1的表达。结论:姜黄素可以通过抑制NLRP3介导的内皮细胞焦亡,改善内皮细胞功能。
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