【摘 要】
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目的:探究低剂量辐射对机体mi RNA影响,筛选低剂量辐射生物标志物,为低剂量辐射损伤防护提供实验基础和理论依据。方法:分别用12.5μGy/h,25.0μGy/h,50.0μGy/h辐照C57BL/6J小鼠120 d,每天辐照8 h,摘眼球取血,分离血清,提取血清总RNA,建立小RNA文库,测序得到差异表达mi RNA,并运用GO和KEGG对差异表达mi RNA进行靶基因富集性等生物信息学分析。
【基金项目】
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甘肽S-转移酶P1调控低剂量辐照损伤的信号通路研究。湖南省自然科学基金（2019JJ40238）;2019-2021； 丙基二硫对低剂量辐照造血系统损伤保护作用及机制研究。湖南省卫生健康委重点课题 （202102051816）,2021-2023；
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目的:探究低剂量辐射对机体mi RNA影响,筛选低剂量辐射生物标志物,为低剂量辐射损伤防护提供实验基础和理论依据。方法:分别用12.5μGy/h,25.0μGy/h,50.0μGy/h辐照C57BL/6J小鼠120 d,每天辐照8 h,摘眼球取血,分离血清,提取血清总RNA,建立小RNA文库,测序得到差异表达mi RNA,并运用GO和KEGG对差异表达mi RNA进行靶基因富集性等生物信息学分析。结果:与对照组相比,以p＜0.05为标准,12.5μGy/h辐射组差异表达mi RNA有12个,其中有6个表达上调,6个表达下调;25.0μGy/h辐射组差异表达mi RNA有4个,其中1个表达上调,3个表达下调;50.0μGy/h辐射组差异表达mi RNA有3个,均表达下调。总差异mi RNA靶基因GO富集性分析显示靶基因主要富集在生化反应过程,细胞膜和蛋白质结合相关机制通路;KEGG富集性分析显示涉及癌症相关靶基因最多,通路主要富集在轴突介导,磷酸肌醇代谢和磷脂酰肌醇信号系统这三个方面。结论:低剂量辐射可以改变C57BL/6J小鼠血清mi RNA表达谱;差异表达mi RNA靶基因通路与DNA损伤,神经损伤和癌症发生等密切相关。目的:研究mi R-181c-3p在低剂量辐射DNA损伤中的作用机制;深入阐明低剂量辐射引起细胞DNA损伤的作用及机制,为低剂量辐射损伤防护提供实验基础和理论依据。方法:构建低剂量辐射人B淋巴GM12878细胞模型,QPCR检测mi R-181c-3p的表达,双荧光报告基因实验验证mi R-181c-3p靶基因,构建mi R-181c-3p-mimic-GM12878细胞模型,siLIF-GM12878细胞模型;WB和免疫荧光技术检测γ-H2AX的表达,WB检测LIF,MDM2,p53,p-p53-s6蛋白的表达。结果:与对照组相比,14.0μGy/h辐照28 d细胞中,WB和免疫荧光结果显示γ-H2AX表达上调,QPCR结果显示低剂量辐射GM12878细胞28 d,mi R-181c-3p表达下调;双荧光报告基因实验显示mi R-181c-3p靶向抑制LIF;WB结果显示低剂量辐射上调LIF、MDM2、p53、p-p53-s6的表达;增强mi R-181c-3p表达可以抑制LIF和MDM2的表达,增强p-p53-s6的表达;si RNA干扰LIF后,WB结果显示γ-H2AX,LIF,MDM2和p53表达下调,p-p53-s6表达上调。结论:低剂量辐射能引起GM12878细胞DNA损伤,其可能机制是低剂量辐射下调mi R-181c-3p表达,激活LIF和MDM2,抑制p53的活性引起DNA损伤。
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