【摘 要】
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目的:明确脾脏切除对骨髓间充质干细胞（Bone Mesenchymal Derived Stem Cell,BMSCs）修复TBI（Trauma Brain Injury,TBI）大鼠血脑屏障（Blood Brain Barrier,BBB）的影响及其可能机制,以期为BMSCs应用于TBI治疗提供理论依据。方法:1)体外分离培养大鼠BMSCs,采用流式细胞术检测细胞表面CD29、CD44、CD34
【基金项目】
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国家自然科学基金（NSFC82060245）； 贵州省科技计划项目【2020】4Y149;[2019]5661；
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目的:明确脾脏切除对骨髓间充质干细胞（Bone Mesenchymal Derived Stem Cell,BMSCs）修复TBI（Trauma Brain Injury,TBI）大鼠血脑屏障（Blood Brain Barrier,BBB）的影响及其可能机制,以期为BMSCs应用于TBI治疗提供理论依据。方法:1)体外分离培养大鼠BMSCs,采用流式细胞术检测细胞表面CD29、CD44、CD34、CD45分子表达,并分别行油红O染色、茜素红染色、阿利辛蓝染色对BMSCs成脂、成骨、成软骨分化特性进行染色鉴定。2)原代BMSCs悬液制备,蛋白印迹法（Western Blot,WB）检测其CXCR4表达及体外分别用0、50、100ng/ml SDF-1干预BMSCs,检测穿膜细胞数量,并将BMSCs用于后续大鼠模型尾静脉注射。3)采用随机数字表法,将75只大鼠分为（1）Control组、（2）TBI组、（3）TBI+SPX组、（4）TBI+BMSCs组、（5）TBI+SPX+BMSCs组。（2）（3）（4）（5）组参照Fenney法建立TBI模型,（4）（5）组于建模后0.5h,24h,48 h分别经尾静脉注射2×109/L-1BMSCs悬液1ml,（3）（5）组于TBI大鼠建模后半小时内行脾脏切除（Splenectomy,SPX）;3)神经功能评分（Modified Neurological Severity Score,m NSS）观察各组3d神经功能;于TBI建模后3d处死大鼠,分离获取各组脑组织,分别行HE染色,干湿重法评估脑组织含水量,比色法测定伊文思蓝（Evans Blue,EB）渗出量,并用WB检测紧密连接蛋白Occludin、Claudin5、ZO-1表达水平;免疫组化及WB检测各组大鼠脑组织SDF-1和CXCR4表达水平。结果:1)经细胞形态学鉴定,流式细胞术检测及分化特性鉴定,证实培养的细胞具有类似于成纤维细胞样的形态特征及表达特定的表面分子,具有良好的干性及多向分化潜力,鉴定为BMSCs。2)体外实验结果证实BMSCs细胞表面CXCR4表达阳性,且BMSCs向SDF-1迁移具有浓度依赖性的特征。3)与Control组相比,TBI+BMSCs组TBI大鼠行为学评分下降（P＜0.05）,脑组织神经元损伤、组织水肿及炎性浸润程度减轻,脑组织含水量及EB渗出减少（P＜0.05）,血脑屏障紧密连接蛋白Occludin、ZO-1蛋白表达增加（P＜0.05）,脑组织SDF-1和CXCR4表达均增加（P＜0.05）。4)与TBI+BMSCs组相比,TBI+SPX+BMSCs组TBI大鼠m NSS评分下降（P＜0.05）,脑组织神经元损伤、组织水肿及炎性浸润程度减轻,脑组织含水量及EB渗出减少（P＜0.05）,血脑屏障紧密连接蛋白Occludin、Claudin5、ZO-1蛋白表达增加（P＜0.05）,脑组织SDF-1有增加趋势,CXCR4表达显著增加（P＜0.05）。结论:1)脾脏切除可增强BMSCs修复TBI大鼠血脑屏障作用;2)脾脏切除可增加TBI大鼠脑组织CXCR4表达。
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